158004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-amino-2'-dezoxi-kanamicin előállítására

158004 29 niaimicint egyetlen frakció formájában izoláljuk. A kapott frakciót btöményítjük és fagyasztva szárítjuk. A 2'Hamiino-2'-deoxi-kanamicint tartalmazó nyers port víz-dimetilíörmaniid elegyből átkiristályosítjuk. 1,9 g 2'-amino-2'-dieoxi-kaina!miicint kapunk színtelen, tűs kristályok formájában. 10. példa: 15 liter, a 9. példában ismertetett összetételű táptalajt iStreptomyoes kanamyoéticus 3AG (mutánssal oltunk be, és levegőztetés és keverés közben 28 C°^on inkubáljuk. A tenyészetben felhalmozódó 2'-amino-2'-deoxÍHkianaimicin menynyisége az inkubálás kezdetétől számított 6 nap elteltével maximumát ér el. A tenyészetet ezután a 9. példában megadott módon kezeljük. 1,2 g kristályos 2'-amino~2'-dieoxi-kaniamioint kapunk. 11. példa: 15 liter, a 9. példában ismertetett összetételű táptalajt Streptomyoes kanamyceticus 18—8 mutánssal oltunk be, majd keverés és levegőztetés közben 28 C-on (inkubáljuk. A tenyészetben felhalmozódó 2'-3mino-2-dieoxi-fcanamicin mennyisége az inkubálás kezdetétől' számított 7 nap éltelitével maximumot ér el. 30 7. táblázat Kísér- Alkalmazott lét törzs száma 10 15 20 30 A tenyészetet ezután sa 9. példában megadott módon kezeljük. Kb. 2,2 g (kristályos 2'-amino- g5 -2'jdeoxii-kanamicint kapunk. 12. példa: A 9. példában ismertetett eljárást ismételjük meg azzal a különbséggel, hogy Streptomyces kanamyceticus 19—2 mutánst alkalmazunk. A 9. példához hasonló [eredményt lérünk el. 3,15 g kristályos 2%amiino-2'-deoxi4tanam;icint kapunk. 13. példa: Összehasonlító kísérletsorozatot végeztünk annak igazolására, hogy az A—4—6, 3AG, 18— 8 és 19—2 mutánsok laz alap törzzsel (Streptomyces kanamycaticus 0—4—^1—) szemben nem várt módon nagyobb ímennyiségű 2'^amino-2'-deoxi-kanamicin termelésiére képesek. A kísérletekben a Streptomyoes kanamyeticus 0— —4—1 alaptöírzs és az A—4—6, 3AG, 18—8 és 19—2 mutánsok tenyésztését a 9. példában megadott módon, azonos összetételű táptalaj és azonos f érmen tarok felhasználásával, 28 C°-on. 150 órán át végeztük. A tenyésztés befejeztével a kapott tenyészet 2'-amino-2'-deoxi-kanamicin és kanamioin A tartalmát megvizsgáltuk. Az eredményeket a 7. táblázatban ismertetjük. 50 60 2'--amino-2'-deoxiktanamicin tartalom, mcg/ml Kiana- 2'-amino_ micin -2'-deoxi-A -karbamitarta- oin aránya lom a kanamimcg/ml cin A-hoz 1 0—4—1 alaptörzs 26 2 A—4—6 mutáns 430 3 3AG mutáns 285 4 18—8 mutáns 520 5 19—2 mutáns 700 2790 0,94:100 1970 21,7 1785 15,9 1900 27,5 1690 43,8 100 100 100 100 A fenti 1. kísérfliet összehasonlításul szolgál, a 2. kísérlet a 9. példának, 3., 4. és 5. kísérlet a 10., ,11. ill. 12. példának felel meg. 15—15 liter kapott (táptalajt a 9. példában 25 megadotlt módon kezelve a lehető legnagyobb mennyiségű 2'-amino-2'-deoxi-kaniamái

cint és kanamicin A-t izoláltuk. Az izolált termékek mennyiségét a 8. táblázatban ismertetjük. 8. táblázat Ki' 2'-amino-2'-s!ér- Alkalmazott -deoxi-kanalet törzs micin hozam, szárma g kanamicin A hoziaim, g 40 45 1 0—4—1 alaptörzs 0,1(2 2 A—4—6 mutáns 1,90 3 3 AG mutáns 1,20 4 18—8 mutáns 2,20 5 19—2 mutáns 3,15 26,8 19,0 15,8 17,6 16,1 A 8. táblázatban közölt adatokból látható, hogy az A—4—6, 3A.G, 18—.8 és 19—2 mutánsok a Streptomyoes fcanamyceticus 0—4—1 «liaptörzzsel számiban lényegesen nagyobb aktivitással rendelkeznek a 2'-amino-2'-deoxi-kanamicin termelésében. A 14. és 15. példában a találmány szerinti eljárás egyik kiviteli módjában alkalmazható NK—1001 és NK—1003 antibiotikum adalékig anyagok előállítását ismertetjük. 14. példa: 2,0% keményítőt, 3,0% maltózt, 3,0% szójabablisztet, 1,0% nátriumnitrátot és 0,5% nátriumklioridot tartalmazó 15 liter folyékony táptalajt Streptornyoes kanamyceticus 0—4—1 törzzsel oltunk be, és keverés és levegőztetés 65 -közben 28 C°-on inkubáljuk. 80 órás inkubálás 15