158004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-amino-2'-dezoxi-kanamicin előállítására
31 158004 32 után a közeghez 30 g streptidint adunk, és az inteubálást további 80 órán át folytatjuk. Ekkor ia tenyészetben felhalmozódó .NK—1001 antilbotikum mennyisége maximumot ér el. A tenyészetet szűrjük, a kapoitt 14 liter szűrletet 4 liter Amberlite IRC—50-el (ammóniumfoirima) kezeljük és így az antibiotikumot adszorbeáljuk. A gyantát 0,5 N vizes ammónia oldattal eluáljuk, az aktív frakciókat összegyűjtjük és betöményítjük. A tooncentrátumot l'OiO ml vízben oldjuk és 1 g aktív szénnel 30 percig keverjük. A derített oldatot szűrjük,majd 2 liter Amberlite CG—50-el (ammóniumfonma) kezeljük. Az adszorbeált antibiotikumot tartalmazó gyantát 0,3 N vizes ammónia oldattal eluáljuk. A kanamicin A kiválása előtt egyetlen frakció formájában választjuk el az N'K—1001 antibiotikumot tartalmazó oldatot. A kapott oldatot betöményítjük és fagyasztva szárítjuk. Nyers, fehér por alakjában 28,5 g NK—1001 antibiotikumot kapunk. A kapott nyers port 12 ml víziben oldjuk, és a kristályokat 50 ml metanol részletekben történő hozzáadásával kicsapjuk. Szűrés ós szárítás után fehér, tűs kristályok formájában 17,4 g NK— 1001 antibiotilkumoit kapunk. Elemi analízis alapján a termék 44,27% szenet, 7,09% hidrogént és 8,95% nitrogént tantálmáz (mórt értékek), ként, halogént és hamut nem tartalmaz. A termeik gőznyomásméréssel megbatározott molekulasúlya 492. 15. példa: 2,0% keményítőt, 3,0% maltózt, 3,0% szójabablisztet, 1,0% natriumnitratot és 0,5% nátriumkloridot tartalmazó 15 liter táptalajt Streptomyces kaniamyceticus 0—4—1 törzzsel oltunk be, iés keverés és levegőztetés közben 28 C°-on inlkubáljuk. 20 órás iínikübálás után 25 g, a 14. példa szerint előállított NK—1001 antibiotikumot adunk a tenyészethez, és az inkubálást keverés és levegőztetés közben folytatjuk. 6 nap elteltével a tenyészetben felhalmozódott NK— 1003 antibiotikum mennyisége maximumot ér el, A tenyészetét szűrjük, és a kapott 14 liter szűrlíetét az antibiotikum adsziorbaálása céljából 4 Játer Amberiitie IRC—50 (ammónium-foirma) gyantával (kezeljük. A gyantát ezután 0,5 N vizes aimmónia-oldiaittai eluáljuk, és az eluétum aktív frakcióit összegyűjtjük, majd betöményítjük. A konoentrátumot 100 ml vízzel elegyítjük, ós 1 g aktív szénnel keverjük. A kapott derített oldatot szűrjük és 2 liter Aimberlite CG— 50-^el (ammónia-fomma) kezeljük. Az adszorbeált antibiotikumot tartalmiazó gyantát 0,3 N vizes ammónia-oldattal eluáljuk. Először a kanamicin A-I izoláljuk, majd egyetlen frakció formájáiban választjuk el az NK—1003 antibiotikumot. Az utóbbi frakciót betöményítjük és fagyasztva szárítjuk. Nyers por alakjában 11,3 g NK—1003 antibiotikumot kapunk, amelyet víz-etanol ölegyből átkiristiályosítunk. Szárítás után fehér, tűs kristályok formájában 7,5 g NK—1003 antibiotikumhoz jutunk. A termiek elemi analízis alapján 44,42% szenet, 7,81% hidrogént, és 13,11% nitrogént tar-5 talmaz (mórt értékek). A termék niiolelkulasúlya gőznyomásmésrés alapján 305 (egy molekula kristály metanolt tartallmiazó anyag). 10 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás 2'-amino-2'-dezoxi~ikanamicin előállítására, azzal jieMlemezve, hogy a) valamely Streptomyaes kanamycaticus tör-15 zset egy szénhidrátot és nitrogéntartalmú tápanyagot tartalmazó táptalajon, aerób körülmények között, legalább egyfajta aminoglükóz-dezoxisztreptarnin származék jelenlétében tenyésztünk, vagy 20 b) valamely, a 2'-a, mino-2'-!dezoxi-ikanamicinnek a kanamicin A-hoz viszonyítva megnövelt mennyiségi arányban való termelésére képes Streptomycies kanaimyaetiicus itermoszeteiS mutáns 'törzset bármely szén- és nitrogénforrást 25 tartalmazó táptalajon aerób körülmények között tenyésztünk, és az ennek során képződött 2'-amino-2'-dezoxi-feanamicint a tenyészetből elkülönítjük. 2. Az 1. igénypont a) változatta szerinti el-30 járás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy a táptalajhoz aimiinoglüikóz adalékként 3--lamino^glükózt. vagy 6-amino-glülkózt adunk. 3. Az 1. igénypont a) változata szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, 35 hogy a táptalajhoz gtlükozlid-típusú aminoglükóz-dezoxisztreptamin-jsziármazéík adallókkién't paromamint, dezoxiszltreptamiin-o-kianozamidint, neamint, NK—1001 antibiotikumot, vagy NK— 1003 antibiotikumot alkalmazunk. 40 4. Az 1. igénypont ib) változata szerinti eljárás foganatosítása módja, azzal jellemezve, hogy Sitreptomyoes kanaimyceticus mutánsként a Streptomyces kanamyoeticus A—4—6, 3AG,' 18—'8 vagy 19—2 mutáns törzsek valamelyikét 45 alkalmazzuk. 5. Az előző igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezvje, hogy a mikroorganizmus tenyésztése során ka-50 pott fermentációs levet Vagy annak szűrlíetét kationcserélő gyantával hozzuk érintkezésbe, a gyantán így ladszarbeáltiatott 2'^amino-2'-dezoxi-kanamicin és kanamicin A antibiotikumot vizes ammóniával eluáljuk, az eluátum akltív 55 frakcióit anioncseriélő gyantával órintkeztetjük, majd erről a gyantáiról frakcionált eluélássial a 2'-aminio-2'-dezoxi-kana!micint a kanaimicin A antibiotikumtól elkülönítve eluáljuk, a 2'^ammo-2'^dezoxi-kanamicint tartalmazó frakció-6€ kat 'betöményítjük, fagyasztiószárításniak vetjük alá, az így por alakban kapoitt 2'-amino~2'^dez~ oxi-kaniamicin nyers terméket vízben oldjuk, az oldatot kationicserélő gyantával ériintkeztietjük, a gyantát vizes ammóniával frakcionálftan eluál-65 juk, a még kanamicin A-val szennyezett első 16
