158004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-amino-2'-dezoxi-kanamicin előállítására

158004 27 28 deoxistreptamin-taminogilükóz-származékokat adtunk a táptalajhoz. 150 órás tenyésztés után a tenyészetet az 1. példában megadott módon kezeltük, s a lehető legnagyobb mennyiségű A fenti és az alábbi következő táblázatokban megadott antibiio'tilkum^kon'oentráiciókat a kanamicin-típus antibiotikumok mennyiségi meghatározására ismert 'és az irodalomban [Journal of Antibiotics, Ser. B Vol. 6 (1953. július), 312—314.] leírt eljárással határoztuk meg. Kísérleit! mikroorganizmusként Diplococcus (pneumoniae került alkalmazásra; az eljárás az ún. „difeirenciális mikirofooiilóigiai meghatározási mód" (az idézett irodalmi közlemény ismerteti e módszert) elvén alapul és a írniikroorgianizmusdk szienzitivitásia szempontjából a kétféle antibiotikum, a kanamicin A és a 2'-amino-2'-diezoxi-lkaniaimioin irányában mutatkozó különbséget használja ki a kétféle antibiotikum meghatározásaira. A példáikban leírt frakcionált dluálási eljárással {ezt az eljárást az irodalom kroimatioígráfiás eluálásniak is neviezi) a 2'-aimino-2'-dezoxi-kanamiciin élesen elválasztható a kíanamicin A antibiotikumtól és a leírt eljárással "teljesen tiszta állapotban nyerhető ki, ami papíiHkromatogiráfiás analízissel igazolható. Mint a 6. táblázat adataiból látható, a 2'Hamino-2'-deoxi^kan.amicin termelés jelentősen emelkedik, ha a táptalajhoz amiMoglüikózt, vagy deoxisteepitarnin^aniinoglüíkóz-szárirnazékioit adunk. A táblázat adatai azt is igazolják, hogy a találmány szerinti eljárás egyik megvalósítási módja jelentős emelkedést eredményez a 2'-aimino~2%deoxi-fcana!imicin termelésében. A találmány szerintii -eljárás másaik fogaraatosítási módját a 9—13. példáikban ismertetjük. 2'-aimino-2'-deoxi-kananiicin't és kanamicin A-t izoláltuk. Az izolált termékeik mennyiségét és a vizsgálatok részleteit a 6. táblázatban ismertetjük. 9. példa: 3,'0% malítózt, 2,0% keményítőt, 3,0'% szójabaíbliszteit, 1,0% nátriumffitirátoit és 0,5% nái~ riumlkloridoit tartalmazó 15 liter táptalajt Streptomyces íkanamyceticus A—4—6 mutánssal oltunk be, és keverés és levegőztetés közben 28 C°-on infcufoáljuk. A tenyészetben felhalmozódó 2'-aimino-2'-dieoxi-!kanamiein mennyisége az inkubálás kezdetétől számított 6. nap elteltével maximumot ér el. A tenyészetet szűrjük, a kapott 14 liter szűr-45 lelteit 4 liter Amfoerlite IRC—50 (am>móniumfonma) gyantával kezeljük. A gyantát 0,5 N vizes ammónia-oldattal fokozatosan eluáljuk. Az aktív frakciókat összegyűjtjük, sziruppá bepakoljuk, és a kapott szirupot 500 ml vízben 50 oldjuk. Az oldatot 6 g alktív szénnel derítjük. Az aktív szenét az oldatból szűréssel eltávolítjuk és a szűirleteit 600 ml Dowex 1x2—n (OH-foirima) kromatográfiásam eluáljuk. A 2'Ha!mino^2'-deoxi-kanamicint a kanamicin A kiválása előtt eluáljuk. A nagymennyiségű 2'iaimino-2'-deoxÍHkanamieint tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bötöményítjük 'és fagyasztva szárítjuk. A kapott 3,2 g nyers port 50 ml vízben oldjuk, és a vizes oldatot az antibiotikum adszíorfoeálálsia céljából lAmbeinlite CG—50 (ammoniuniHforma) gyantával kezeljük. A gyantát 0,1—0,5 N vizes ammónia-oldattal eluáljuk. A kismennyisógű kísérő kanamicin A-t első-65 ként választjuk el, és a 2'-aminio-2'-deoxi-katáblá: La- -a .s l- -c ja -1 át- n ra) tan (m i eddif a 3. sérlet 35 40 45 50 55 60 . 65 6. táblázat Kísérlet száma Adalékanyag 2'Beada-amino-Adalák- golás -2'anyag idő-deoximennyi- pontja -ikanasége, g kezdétmicin kanamicin A tartalom tői (óra) tartalom (mog

/

ml) (mcg/ml) 2'-amino-2'-deoxi-kanamicin hozam (g) 2'-al

mino-2'-deoxi^kaniaimicin aránya a kanamicin A tartatomhoz Kanamicin A hozam. 1 adalék nélkül — — 26 2790 0,12 0,94 : 100 26,8 2 3-amino-glükóz 50 22 240 1480 1,10 16,4 : 100 12,7 3 6-4amino-glü!kóz 50 22 225 1730 1,00 1.3,1 : 100 15,2 4- .NK—1001 antibiotikum 30 20 575 1240 2,50 46,5 : 100 11,2 5 NK—1001 antibiotikum 30 0 480 1450 2,20 44,5 : 100 13,6 6 NK—1003 antibiotikum 30 20 345 1700 1,50 30,5 : 100 16,00 7 Neiamin 45 20 260 1390 1,20 18,0 : 100 12,8 A fenti kísérletek közül az 1. sz. kísérlet az eddigi eljárásnak felel meg és csupán összehasonlításul szolgál, a 2. sz. kísérlet az 1. példának, a 3. sz. kísérlet a 2. piéldánalk, a 4. sz. kísérlet a 3. példának, az 5. kísérlet a 6. példának, a 6. kísérlet a 4. példának és a 7. kísiéirlet az 5. példának felél meg. 14