158004. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2'-amino-2'-dezoxi-kanamicin előállítására

158004 23 A 4. ábra az NK—1003 antibiotikum Nujollban felvett infravörös abszorpciós spektrumát ábrázolja. Az 5. ábra az^ NK—1003 antibiotikum 1 mg/ kg koncentrációjú vizes oldatának ultraibolya abszorpciós spektrumát mutatja be. A 6. ábra az NK—1003 antibiotikum Nujol-24 ban felvett infravörös abszorpciós spektrumait ábrázolja. A találmány szerinti eljárás egyik megvalósítási módja szerint adalékanyagként felhasználható NK—1001 iéis NK—1003 antibiotikumok antibafcteriális spektrumát az 5. táblázat ismerteti. 5. táblázat Vizsgált mikroorganizmus NKTeljes gátláshoz szükséges minimális koncentráció meg/ml -1001 antibiotikum NK—•1003 antibiotikum Aeroíbacter aerogenes IAM 1102 Alcaligenes faecalis Bacillus agri Bacillus súbtilis ATCC 6633 Candida albicans Diploooceus pneumoniae Type 31 ID Esdheiiöhia coli IAM 1253 Klebsiella pneumoniae 607 Lactobacillus fermenta ATCC 9338 Staphylococcus albus PCI 1200A . Staphylococcus aureus 209P Staphylococcus aureus Teriashima Mycobacterium phlei MS Mycobacterium 607 Salmonella paratyphi A Sareina lutea PCI 1001 Saceharomyees oerievisiae IAM 4626 Shigella flexneri EW 10 2a Strepftococcus haentorytieus D—90 31,2 15,6 — 3,9 7,8 2,0 6,;25 3,125 >500 >500 500 250 125 125 31,2 31,2 3,9 3,-9 15,6 7,8 62,5 62,5 6,25 3,125 15,6 25 ' 62,5 50 6:2,5 62,5 500 250 >500 >500 6,25 3,125 500 500 A találmány szerinti eljárás egyik kiviteli módját az 1—8. példákban részletesen ismerteit j ük. 1. példa: 3,0% keményítőt, '2,0% maltózt, 2,5%'szójabablisztet, 1,2%. nátniumni'trátot és 0,5% náitriumiMoridot tartalmazó 15 liter folyékony táptalajt Streptomyces banamyoéticus 0—4—1 törzzsel oltunik be, éis 2:8 C°^on levegőztetés és keverés közben inkubáljuk. 22 órás inkubálás után 50 g 3-amino-glükózt adunk a tiptalajhoz 'és az inkubálást f oly tatjuk. A tenyészetben (képződött 2'-amino-2'-deoxi-kianalmicin mennyisége a 150. óra végén maximumot ér el. A tenyészetet ezután szűrjük és a szűrletet 4 liter Amibarlite IRC—50-el (ammónium-foirm:a) kezeljük;. Az adszorbeált antibiotikumot a gyantáról 0,5 N vizes aimimőniávaíl eluáljuk. Az aktív frakciókat összegyűjtjük és sziruppá betömiényíitjüik. A szirupot 500 ml vízben oldjuk 'és laz oldatot 6 g aktív szénnel kezelve derítjük. Az oldatiból az aktív szenet szűréssel eltávolítjuk, és a szűrletet 600 :ml Dowex (OH— fornna) kromatográfiás eluciónaik vetjük alá. A toanamyoin A elválasztása előtt először a 2'-40 45 50 55 60 65 -ammo-2'~deoxÍHkanamiaint tartalmazó frakciókát eluáljuk. A nagymennyiségű 2'-amino-2'~ -deoxi-banianiicint tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, betöményítjük és" fagyasztva szárítjuk. Nyers por alakjában 2,2 g 2'-amino-2'-deoxa-kianaimácfet kapunk. A kapott 2,2 g nyers port 50 ml vízben oldjuk és az oldatot Arnbeirlite CG—50-el (amímónia-fiorrna) kezeljük. A gyantát kromatográfiásan 0,1—0,5 N vizes ammóniával eluáljuk, elsőnek á kísérő fcismennyisiégű kananiicin A-t Választjuk el. A 2'^aniin.o-2'-deoxi-kan.aimi'aint ezután egyetlen frakcióbian eluáljuk, a kapott frakciót betöményítjük >és fagyasztva szárítjuk. A kapott nyers port víz-dimetilforimaniid elegyből áiíkiristályosítj ük. Színtelen, tűs kristályok formájáiban 1,1 g 2'-aimiinio^2'-deoxÍHkanamicint kapunk. Elemi analízis álapján a termék 42,62% szeneit, 7,52% hidrogént és 12,30'% nitrogént tartalmaz. A termék molekulasúlya 435 (mért érték). 2. példa: Az ,1. példában ismertetettel azonos összetételű 15 liter folyékony táptalajt az 1. példában leírt Streptomyces kiananiyaeticus törzzsel oltunk be, niiajd beverés és levegőztetés közben 28 C°-on inlkübáljuk. 22 órás inkubálás után li