157483. lajstromszámú szabadalom • Eljárás urikáz előállítására

8 157483 4 niiif.arme, Fuís. 'ooeruleuim, F<us. oxysporum és Fus. orthoceras, Stemphylium macrosporoideum, Macrosporium apiospermum, Absidia glauca, Mueor muoedo, Mucor hismalis és Mucor racemosus, Rhizopus arnhizus ós Basidiomyeetae, valamint Geotrichum candidum. Az alkalmas 'mikroorganizmusok péidalképpeni felsorolását az alábbiakban ismertetjük. Minden egyes megnevezés mellett feltüntetjük a törzs számát, mellyé! azt nyilvántiatásba vettük, másrészt pedig közöljük az Ameiican Type Culture Collection (A.T.C.C.) által adott, a törzs deponálására vonatkozó iktatószámot. (a) Baktériumok (b) G ombák, élesztők kivételével (c) Élesztők (a) Streptotnycas cellulosae Krainsky 3313, Streptomyces sulfureus Krainsky 105, Bacillus megatherium de Barry 1552, Bacillus megatherium de Barry 1551, Bacillus subtilis Cöhn 5221, Bacillus 'Cereuß FnanMand, Frainlkliaind 1665; (b) Aspergillus flavus Link 601, A.f. Link 602, A.f. Link 603, A.f. Link 604, A.f. Link 605, A.f. Link 606, A.f. Link 608, A.f. Link 609, A.f. Link 620 A.if. Link 623, AJf. Link 624, AI. Link 625, Aspergillus oryziae Cohn 626, A.o. Cohn 627, A.o. Cohn 629, A.o. Cohn 634, Aspergillus tamarii Kita 636, Asp. terricola Marchai 638, Asp. luchuensis Inui 651, Asp. niger Van Tieghem 561, Asp. sydowi Bainier és Sartory 661, Asp. nidulans Wint 682, Asp. wentii Wehmer 579, Asp. fonsecaeus Bainier 808, Asp. clavatus Blcehwitz 549, Asp ustus Thom és Church 575, Asp. terreus Thorn 1960, Asp. ochraaeus Wilhem 585, Penicillium frequentans WestMng 499, Pen. granulátum 503, Pen. giiseum Thorn 505, Pen. canescens Sopp 485, Pen. spinulosum Thorn 521, Pen. thonaii Maire 525, Pen. wiaksmani Taleski 531, Pen. raistrickii (Smith) ' SÍ 7, Pen. expansum Thom 597, Pen. purpurescens Sopp 540, Pen. funiculosum Thom 545, Pen. spiculisporum Lehman 547, Pen. velutinum (Van Beyma) 527, Pen. purpurogenum Stoll 515, Pen. spinulosum Thom 522, Pen., lilacinum Thom 535, Pen. rubrum Stoll 525, Cephalosporium sp. Corda 901, Alternaria tenuis Nees 225, A.t. 415. Fusarium solani Appel& Wollenweber 478, Fus. momliforme Sheldon 727, Fus. coeruleum Saccardo 725, Fus. oxysporium Schelechtendahl 735, Stamphylium macrosporoideum Saccardo 700, Macrosporium apiosperinum 653, Fusarium orthoceras Appel & Wollenweber 729, Absidia glauoa+(Hagem) 1801, Mucor mucedo Brefeld 1202, Mucor hiemaliis Wehmer 1295, Mucor raceniosus Fresnius 1209, Rhizopus arrhizus Fischer 1212, Basidioimycete sp. 150. (c) Geotrichum oandidum Link 801. A találmány tárgya mikrobiológiai eredetű urikáz előállítására és tisztítására szolgáló eljárás, mely lehetővé teszi a terméknek igen aktív alakban való kinyerését. Ez az aktivitás, melyet a továbbiakban részletesebben ismertettek szerint urikáz egységben adunk meg, milligrammonként 10 és 500 egység között mozog A leírás végén részletesen ismertetjük az aktivitásmérési eljárást. A találmány szerinti eljárás az alábbi műveleteket foglalja magába: a termelő mikroorganizmus tenyésztését nemvagy kevésbé spórás mikroorganizmus esetében bármilyen, megfelelően teevertétett és levegőztetett, folyékony táptalajon süllyesztett előtenyésztés útján végezzük, mély a mikroorganizmusok bőséges fejlődését biztosítja 20 C° és 35 C° közötti hőmérsékleten, 4—12 napig terjedő tenyésztési idő alatt, vagy adott esetben megfelelő szilárd táptalajon, mely lehetővé teszi a spórák kinyerését 20—35 C° közötti hőmérsékleten, 6—15 nap közötti tenyésztési idő alatt; az ilymódon előkészített oltóanyaggal urátionokat tartalmazó termelő táptalajt oltunk be és a fermentációt 20 és 35 C° közötti hőmérsékleten kivitelezzük; a micéliumnak a folyékony fázistól való szétválasztását előnyösen a termelés maximuma idején, továbbá az urikáz extrakcióját legalább az ilyen módon szétválasztott részek egyikéből végezzük ; végül a kapott nyers urikázt tisztítjuk. Az oltóanyag előállításához szükséges süllyesztett előtenyésztést főleg Czapek-Dox vagy Sabouraud-féle táptalajon- végezzük, de végezhetjük szilárd közegen, így csiráztatott rizsen is. A sejten belüli urikáznali a mikróbatömegből való kivonása érdekében a találmány egy jellemzője szerint a masszát fagyaszthatjuk, poríthatj-ük és szilárd folyékony extxfakeiót végzünk. A találmány szerint előnyösen alkalmazható igen aktív törzset kapunk az Aspergillus nemhez és a flavus fajhoz tartozó gomba dúsított tenyészetéből. Ugyanakkor alkalmazható az eljárás egyéb sejtenbelüli urikázt termelő mikroorganizmusok esetében is, főleg, de nem kizárólag a fentiekben már felsorolt mikroorganizmusoknál. Analóg eljárás 'alkaknazható a sejtenkívüli urikázt termelő mikroorganizmusok esetében is, melynek során a tenyészet szűrletét azonos módon kezeljük, mint a sejtenbelüli uri'kázokat termelő mikroorganizmus sejtkivonatok esetében. Táptalaj: A táptalajnak tartainiaznia kell mindazokat a szerves és ásványi anyagokat, -melyek a mikroorganizmus jó fejlődéséhez és az urikáz bőséges termeléséhez szükségesek. A táptalaj a következő komponenséket tartalmazza: .szénforrásiként főleg, de nem kizárólag egyszerű cufcrdk, mint glukóz vagy szacharóz, különkülön vagy keverékben, 1—10 súly% koncentrációban (a táptalaj teljes mennyiségéhez viszonyítva) ; nitrogénfoirrásként többnyire ásványi sók, mint ammóniumszulífát vagy klorid, alkálinitrát 10 15 25 25 30 35 40 45 50 5S m