157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére
157415 23 rén próbareaíkciókkal határozzuk meg, amelyek sarán a reagensek kis aliqruot mennyiségeit reagáltatjuk a rendes reakció megvalósítása előtt. A reakciókat 4 és 1,1 közötti pH-értékeken folytatjulk le —5 C° és +5 C° közötti hőmérsékleten, általaiban arihidrid-tßeleslaget használva. A hőmérsékletet 'belső vagy külső hűtés, vagy belső és külső -hűtés; mellett tartjük a kívánt értéken. Az aláibbi savak anhidridjeit használjuk trifluoraoetil-származíékakként: szerin treorrin /J-hidroxi-leucin y-ihidroxi-norvalin. Az aláibbi savak anihidridjeit használjuk S-benzil-származékokként: cisztein />'-tiol-norvalin penicillamin. A tirozin N-karboxi-anhidridjét tetrahidrofurán-származékának alakjában használjuk. A lizin és az ornitin co-amino-csoportjait karbobenziloxi-csoporttal védjük, amelyet a végtermékből hidrogénezéssel távolítunk -el. Egyéb védőcsoportokat szintén eltávolítunk a reakció végén. 10 15 20 t5 £0 1 2 3 4 5. 6 7 8 9 10 11 12 13 14. 15 16 17 18 19 20, 21 22 23 24 25, 26 .27 28. 29 30. 31 Glicin — GLY Alanin — ALA Leucin — LEU Izöleucin — ILEU Valin — VAL Fenilalanin — PHE Tirozin — TYR Triptofán — TRY Arginin — AGN Lizin — LYS Hisztidin — HIS Szerin — SER Treonin THR Prolin — PRO Cisztein — CYS Cisztin — CYST Metionin — MET Aszpartinsav — ASP Glutaminsav — GLU Aszparagin — ASP Glutamin — GLN a-aminoadipinsav — «,AD .a^aminopimelinsav — a,PI a-aminoszuberinsav — a:,SU a-aminoszebacinsav /?-,metiiaszpar linsav /J-metilglutaminsav Cf,,SE /3M,ASP /?M,GLU /?,/3-Dimetilaszpartinsav — '/?M,/?M,ASP Ornitin —- ORN c-aminoizovai.sav — e,IBU a-Aminodietil-ecetsav — ADA 40 45 50 55 60 24 32. cí-Aminodiizopropilecetsav — r/,ADIA 33. a-Aminoetilizopropilecétsav — a,AEIA 34. ^-Hidroxi-norvialin — y30H,NVAL . 35. Penicillamin — PENM - 36. /3-Tiol-norvalin — ^Th.VAL 37. a-Aminofenilecetsav — a,APA 38. • o-Klór-ienilalanin — O-Cl-PHE 39. Furfurilalamn — FALA 40. Tienilalanin — THALA 41. a-Naftilalanin — a-,NALA 42. 3-Tionaftenil-alanin — TNALA 43. 3-Kumaronilalanin — COU.ALA 44. N-Metilglicin — NM.GLY 45. N-Metilalanin — NM,ALA 46. N-Metilleucin — NM,LEU 47. N-Metiltirozin — NM.TYR A fenti eljárásnak -megfelelően az alábbi hexapeptideket kapjuk: GLY-ALA-ILEU-VAL-RHE-T YR; TRY-AGN-LYS-HIS-SER-THR; PRÖ-CYST-MET-ASP-GLU-ASN; GLN-a,aAD-oc,PI-,a,SU^,SE-^M,ASP; M.GLU-^M.ASP--ORN- a-IBU-ADA-ia,ADIA; a-AEIA-£OH,NVAL-PENMn/ ŐTh,VALHa,APA-0-CL-PHE; FALA-THALA.a,NALA-TNALA-COU,ALA-NM,GLY; MN,ALA-NM,LEU-NM,TYR-CLY-ALA-LEU; di-LEU-VAL (CYS-bisz ALA; SER-GLU-FALA-NM,ALA-ASN-GLN; és THR-MET-ORN-SER-a,PI-ASP. 2. példa: A szpartil-glicil-glicil-leucin előállítása 2 millimól leucin és 20 ml vizes káliumborát puffer 10-es pH-jú elegyét —5 C°-ra hűtjük, és gyors keverés köziben 2,05 millimól szilárd N-karboxi-glicinanhidridet adunk hozzá. A reakciót 40 'másodpercen át folytatjük, majd a pH-t tömény kén-savval 0 C°-on 5-ös értékre állítjuk be, miközben kb. 10 percen át nitrogén-áramot vezetünk át a reakcióelegyen. Az eljárást 10-es pH mellett megismételjük, a képződött glicií-leucin közibenső termék elkülönítése nélkül, 2,02 millimól N-ka;rboxi-glicmanhidridet használva. így glicil-glicil-leucint kapunk, amelyet nem különítünk el. A reakcióelegy pH-ját tömény káliumhidroxid hozzáadásával 8,5-re állítjuk be, majd gyors keverés közben 2,1 millimól N-'karboxi-aszpartin.savanhidr.idet adunk hozzá 0 C° hőmérsékleten. 30 másodperc eltelte után a reakcióelegy pH-ját 4-es értékre állítjuk be, miközben nitrogén-áramot vezetünk keresztül a • reakcióelegyen. A kívánt tetrapeptidet ammóniumszulfáttal végzett kisózással elkülönítjük. Az N-karboxi-aszpaTtinsavanhidridet a megfelelő anhidriddel helyettesítve és az eljárást megismételve, az alábbi vegyületeket állítjuk elő: glutamii-glicil-glicil-leucin glutaminil-glicil-glicil-leucin 65 aszparaginil-glicil-glicil-leucin. 12
