157415. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peptidek és azok származékainak szabályozott szintézisére
157415 25 3. példa: Tirozil-leucil-fenilalamn előállítása 3 miliimól fenilalanin és 5 g jeget tartalmazó 30 ml vizes káliumborát puffer 10,5 pH-jú elegyét 3 C°-ra hűtjük le, és gyors keverés 'közben 3,2 miliimól szilárd N-karboxi-leuciniaíhidridet adunk hozzá. A reakciót 30 másodpercen át folytatjük, és a pH-t tömény kénsavval 0 C°-on 3-as értékre állítjuk be, miközben nitrogénáramot vezetünk át az elegyen. A termékként kapott leucil^fenilalanint nem különítjük el. A reakeióelegy : pH-ját tömény káliumhidroxid hozzáadásával 10,0-ra állítjuk be, majd gyors keverés közben 3,4 miliimól tetrahidropiranil-tirozin-N-karboxianhidridet adunk hozzá, miközben a hőmérsékletet közelítőleg 0 C°on tartjük. A reakciót egy percen át folytatjuk, és a dekarboxilezést lefolytatjuk olyan módon, hogy a pH-t kénsavval 3-as értékre állítjuk be. A reakcióéi egy et szobahőmérsékletre hagyjuk melegedni, majd egy órán át állni hagyjuk a védőcsoport eltávolítása céljából. A kívánt terméket szilikagél-oszlopon kromatográfiai úton elkülönítjük. Ugyanezt a vegyületet előállítjuk olyan módon, hogy a fenti eljárást megismételjük, és etoxietiitirozin-N-kiarboxianhidridet használunk. 4. példa: Valil-leücil-alanil-cisztein előállítása 2 miliimól cisztin és 30 milliliter vizes káliumborát puffer 10-es pH-jú elegyét kb. 10 C° hőmérsékleten tartjük, miközben gyors keverés mellett 4,1 miliimól N^karboxi-alaninianhidridet adunk hozzá. A reakciót 2 percen át folytatjuk, és a pH-t híg sósav-oldattal 2 C°-on 3^as értékre állítjuk be, miközben nitragérnáraomot vezetünk át a rea'kcióelegyen. Az így kapott cisztil-bisz-alanin terméket nem különítjük el. A reakeióelegy pH-ját 10,2-re állítjuk be. Az elegyet 0 C°-ra hűtjük, és gyors keverés közben 4,2 miliimól N-karboxi-leucinanhidridet adunk hozzá. A reakciót 1 percen át folytatjuk, majd a dekarboxilezést lefolytatjuk a pH-nak 3,5-ös értékre való beállítása útján, miközben nitrogén-áramot vezetünk át a reakcióelegyen. A közbenső termékként nyert di-léucil-(cisztil-bisz-alanin)-t nem különítjük el, hanem 10-es pH- mellett 4,3 miliimól N-karboxi-valinanhidriddel kezeljük 0 C°-on, gyors keverés közben, majd a pH-t 3-as értékre állítjuk be kénsavval, és így dekarboxilezést végzünk. A kapott di-valil-leucil-(c.isztil-'bisz-i alanin)-t kisózzuk a reakcióelegyből. A terméket hidrogénszulfiddal valil-leucil-alanilciszteinné redukáljuk. 26 5. példa: Lizil-glicil-glicil-leucin-acetát előállítása 5 A 2. példa szerinti módon glicil^glicil-leucint állítunk elő, majd az ezt a vegyületet tartalmazó reakeióelegyet gyors keverés közben 40 másodperc alatt 2,5 miliimól szilárd cy-karbobenzoxi-N-karboxi-lizinanhidriddel kezeljük 0 10 C°-on. Nitrogén jelenlétében kénsavval dekarboxilezést végzünk 4-es pH mellett. Az N-karbobenzoxilizil-glicil-glieil-leucin terméket kisózzuk a reakcióelegyből, majd szűréssel kinyerjük. :}• 15 A karbdbenzoxi-csoportot atmoszferikus nyomáson és szobahőmérsékleten azonos súlyú 10^/o Pd/C katalizátor jelenlétében ecetsavas oldatban végzett hidrogénezéssel eltávolítjuk, és a terméket a katalizátor leszűrése után az oldószer 20 eltávolításával elkülönítjük. 6. példa: 25 Glicil-fenilalanil-leucin előállítása 4 miliimól leucin és 20 ml víz 0 C° hőmérsékletű elegyéhez 3,1 miliimól N-karboxi-fenilalanilanhidridet adunk, miközben a pH-t báriu.m'hidroxid-por időnkénti hozzáadásával 10,5-ös S0 értéken tartjük. A reakció egy perc alatt teljesen végbemegy. A pH-<t 10in ' 0 -os kénsav-oldat hozzáadásával 3,5-ös értékre állítjuk be. A kicsapódó 'báriumszulfátot szűréssel eltávolítjuk, és a fenilalanil-leucint tartalmazó szűredéket 35 —3 C°-on 3,2 miliimól N-karboxiglicinHanhidriddel kezeljük, miközben a pH-t báriümhidroxiddal 10,5-ös értéken tartjuk. Tömény kénsav hozzáadásával a pH-<t 3,5-ös értékre állítjuk be és így dekarboxilezést végzünk, majd" a kí-40 yánt terméket fagyasztva szárítással elkülönítjük. Ugyanezt a terméket kapjuk, ha a reakciót úgy folytatjuk le, hogy közben szilárd bárium-45 hidroxid helyett híg vizes nátriumhidroxid- -oldatot adagolunk a reakcióelegyhez. Ebben az esetben természetesen nem képződik báriumszulfát, úgy hogy a szűrési lépést el lehet hagyni. A terméket úgy nyerjük ki, hogy a reakció-50 elegyet először szenet tartalmazó oszlopon vezetjük át. Az ekkor adszorbeálódott peptidet vizes ecetsavval eluáljük, majd fagyasztva szárítással nyerjük, ki az eluáturnból. 55 7. példa: N-Metil-leucil-glicil-glicil-glicil-glicil-izoleucin előállítása 60 4 miliimól glicil-glicil-glicil-glicil-izoleucin és 30 ml vizes káliumborát puffer elegyét 9,5-ös pH mellett kb. O C°-ra hűtjük, majd gyors keverés közben 4,3 miliimól N-metil-leucin-N-karboxianhidridet adunk hozzá. A reakcióele-P.5 gyet 30 másodpercen át gyorsan keverjük, és a
