157327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 19 402 R.P. antibiotikum előállítására

7 157327 8 Az ex'trahalas, elkülönítés és tisztítás különféle módszerei többször ismételhetők ia gyártás kívánalmai szerint, bogy a 19 402 R. P. antibiotikumot iá kívánt oélniaik megfelelő formában kapjuk meg. E kezeléseik után a 19 402 R-P. antibiotikumot előnyösen alkálisója alakjában, nyárjuk. Ezután szükség' esetén átalakíthatjuk a szabad savvá oly módon, hogy íaz alkál-isóból tömény vizes oldatot készítünk, és azt erősen kiationos ioncserélővel hozzuk érintkezésbe. Az alábbi (példákon szemléltetjük a találmány szerinti eljárás gyakorlati végrehajtását, anélkül azonban, hogy a találmányt ezekre kívánnánk korlátozni. Az (aktivitást minden esetben diffúziós módszerrel biológiai úton határoztuk meg, Bacillus subtiilist használva káimutató baktériumként és egy tiszta 19 402 R. P. antibiotikum mintát standardként.' Ezt az aktivitást a szilárd termékek mg-jára, illetve íaz oldatok ml-ére vonatkoztatott egységekben fejezzük ki. [Az aktivitás egysége f(E) ;a terméknek az a legkisebb mennyisége, amely 1 ml alkalmas táptalajban oldva meghatározott körülmények között aikadályozza Staphylococcus aureus 209 P növekedését.] 1. példa: Egy 170 literes feirmentorha betöltjük a következő anyagokat: ikukoirlaalekvár cerelóz nátriumklorid ' magnéziumszuilfát vízzel kiegészítve 4,80 kg 2,40 kg 0,60 kg 0,12 kg 110 ütemre. A keverék pH-jának 660 ml tömény nátronlúggal >(d = l,33) 7,4-re való ibeálMtása után hozzáadunk 0,60 kg kálciumíkairbonátot. Ezután a tenyészközqget 1:22 C°-os vízgőznek 40 percig való átbüboirékaltatásával sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalaj térfogata (120 liter, pH-ja pedig 6,95. A táptalajt beoltjuk „íStneptomyces 6227" törzs 200 ml térfogatú rázott Erlanmieyer-fcultúrajával. Ezután a kultúrát 30°-om 26 óra hoszszat keveirtetve és steril levegővel levegőztetve szaporítjuk. Ez ekkoir alkalmas a termelő kultúra baaltáijára. A termelő kultúrát a következő anyagokikai töltött 800 literes förmemtorban tenyésztjük: kükorieaMkvár keményítő szójaolaj kalciumikarbonát káliumhidrogénfoszfát magnéziumszulfát foobalitklorid, kristályos vízzel kiegészítve 22 kg 8,25 kg 8,25 liter 5,50 kg' 1,10 kg 1,10 kg 11 g 51Ó literre. 10 pedig 6,60 250 nil tömény nátronlúg (d = 1,33) hozzáadása után. Ekkor a keveréket beoltjuk a 170 literes fermtantarból vett '55 liter oltókultúrával. Ezután a kultúrát 30 C°-on 123 óra hosszat Í285 percenkénti fordulatszámú turbinával ikevertatve 'és óránként 25 m3 steril levegővel levegőztetve tenyésztjük. A közeg" pH-ja ennek befejeztével 8,10, és térfogata 520 liter. A farmentlé lantibiotikumtairtalma 2420 E/ml. 2. példa: Az előző példa szarint kapott 2420 E/ml antibiotlikumtartalmú és 8,1 pH-jú fiermentléből 15 520 liternek la pH-ját 37%-os foszforsav oldat hozzáadásával !kieverővel ellátott kádban 4-re alítjuk be. Ezután hozzáadunk 15 kg szűrést segítő anyagot és a 'keveréket szűrőprésben szűrjük. A szűrőlepényt 250 liter vízvezetéki 20 vízzel mossuk. A gyakarlaitilag antibiotikummentes szűredéket és imasóvizet a csatornába bocsátjuk. A szűrőlepényt szuszpendáljuk, elkeverve 270 liter metanolból és a keverék 350 literire való kiegészítéséhez szükséges vízből álló 25 elegyben. Ezután a szuszpenzió látszólagos pH-ját 10 n nátronlúggal 7-ine állítjuk be. A keverést 1 óra hosszat folytatjuk, majd a zagyot szűrőprésen leszűrjük. A szűredéket felfogjuk, és a szűrőlepényt 70% 'metanolt tartalmazó 100 30 liter vizes eleggyel -mossuk. Az egyesített szűrtedék és ,mosóvíz '(összesen 440 liter) antibiotikumtartalma 2320 E/ml. A szűrőlepényt kidobjuk. Az alkoholos szűredéket 37 C°-on 35 torr 35 nyomás alatt 6 literre (koncentráljuk. Ehhez a konoenltrátumhoz 3 liter etanolt adunk. Ezután a kapott oldatból 30 liter etanol és 40 liter aceton elegyével kicsapjuk az antibiotikumot, szűréssel elválasztjuk, acetonnal mossuk, és szá-40 rítókamrában 5 torr nyomás alatt .magszárítjuk, így 1009 g barna terméket kapunk 950 E mg antibiotibumtairtalommal. A termék a 19 402 R. P. nyers nátriumsó ja. 45 50 55 3. példa: A 2. példa szerint kapott termiekből (950 E/mg) 900 g-ot feloldunk 10 liter desztillált vízben. Az oldatot megszűrjük, majd átboesátjuk egy olyan 9 cm belső átmérőjű oszlopom, kb-2 liter/óra ütemben, amely 8 liter klciridfázisú Dowex 1X2 ioncserélő gyantát tartalmaz. Az oszlopot sorban a következő folyadékokkal moissuk: A tenyászíközeget 122 C°-os gőznek 40 percig tartó átbühoirékoltatásával sterilizáljuk. Lehűlés után a táptalaj térfogata 550 liter, pH-ja desztillált vízzel, míg az elfolyó folyadék színtelenné nem válik 8 1, 2 l/óra 60 hangyasav és víz 10 : 90 arányú elegyével 24 1, 12 l/óra hangyasav, víz és metanol 10 : 10 : 80 arányú elegyével 24 1, 12 l/óra metanol és víz 80 : 20 arányú ö5 elegyével 24 1, 12 l/óra 4