157327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 19 402 R.P. antibiotikum előállítására
157327 9 10 Ezután az antibiotikumot ;kb. 10 liter/óira ütemben eluáljuk 1% káliumkloiridot tartalmazó 80 : 20 térfogatarányú metanol-víz eleggyel. Az eiluátumot 10 literenként fogjuk fel, a legaktívabb frakciókat {4, 5 és 6) egyesítjük, és 5 csökkentett nyomás alatt 40 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten 3 literre koncentráljuk. A konoantráturnot 48 ára alatt háromszor diáliizáljuk 40 liter desztillált vízzel szemben egy regenerált •eellulózhártyán át a sók és kü~ io lönféie szennyezések eltávolítására, majd liofilizáljuk. így 35 g 19 402 iR. P. káliumsóit kapunk világosbarna amorf por alakjaiban 13 800 E/mg tartalommal. A termék maximális abszorpciót 15 mutat az ultraibolyában 257 nm-nél (E t cm = 84). 4. példa: 20 A 3. példában kapott tisztított antibiotikumból -5 g-ot feloldunk 20 ml desztillált vízben és 25 g aktív kovasavgéllel elkeverjük. A kapott pépet éjjelen át szobahőmérsékleten 2 torr nyomás alatt megszárítjuk, majd egy előzőleg 25 500 g száraz laiktív kovasavgéllel megtöltött 4 cm belső átmérőjű ^oszlop tetejére helyezzük. Az oszlopon a kiromatograimot előbb 2,4 liter 100 :20 térfogatarányú n-propanol — 2 n aimmóniaoldat-eteggyel, majd 2 liter 80 :20 tér- 30 fogatairányú n-propanül — 2 n ammóniaoldat-eieggyel kifejlesztjük, azután 80 : 30 térfogatarányú n-propanol — 2 n ammóniaoldat-elegygyel eluáljuk, és laz eluáitumot 50 ml-es részleteikben felfogjuk. . Egyrészt az il—50. részleteket, másrészt az 51—75. részleteket egyesítjük, csökkentett nyomás alatt 40 C°^nál alacsonyabb hőmérsékleten a prapanol elűzésével koncentráljuk, majd liofilizáljuk. Az 1—50- irészletek adják az A adagot, 1300 mg~ot 15 700 E/mg tartalommal, az 51—75. részletek a B adagot, 1355 mg-ot IS 800 E/mg tartalommal. Az A adagból 1200 •mg-ot feloldunk 20 ml desztillált vízben, és keverés közben kis részletekben hozzáadunk állandó pH 'érteikig Amberlite IR 120 ioncserélő gyantát (savas fázisút). Utána a gyantát szűrőn elválasztjuk, és 10 ml 35 40 45 desztillált vízzel mossuk. A szűredéket és a snoisóvizet egyesítve a pH-it nátronlúggal 8,0-ra állítjuk be, és az oldatot regenerált cellulózhártyán éjjelen át kétszer 1 'liter desztillált vízzel sziemben dializáljuk. A hártyán át neim jutott oldatot liofilizálva la 19 402 R. P. nátriumsóját kapjuk szilárd alakban. Ily módon 945 g tiszta 19 402 R- P.-nátriumsóhoz jutunk 17 800 E/mg tartalommal, a következő elemi összetételiéi: C 48,25, H 6,9, O 36,70, N 4,1, P 2,4, S 0,6 és Na 3,05%- ; Szabadalmi igénypont: Eljárás a 19 402 R. P. antibiotikum és alkálisói előállítására — az antibiotikum elemi összetétele: 47,64% C, 7,34% H, 37,81% O, 4,22% N, 2,47% P és 0,62% S, nátriumsójának pedig a következő tulajdonságlai Vannak: amorf, fehér poir, nagyon jól oldódik vízben, oldódik vízmentes metanolban és vizes etanolban, propanolban és izopiropanolban, nagyon rosszul oldódik vízmentes etanolban, propanolban, iizopropanolban és butamolbán, gyakorlatilag oldhatatlan aoetonban, hexánban, benzolban, éterben, kloroformban és etiilaoetátbán; ultraibolya színképében abszorpciós maximum van 2:56 nm-nél '('E^m — = 102,5) és elemi összetétele: 46,25% C, 6,9% N, 36,70'%, O, 4,1%, N, 2,4% P, 0,6%, S és 3,05%, Na — azzal jellemezve, hogy Streptomyces peruviensis 6227 (NRRL •2767) baktériumot asszimilálható szenet és nitrogént, továbbá szervetlen sókat tartalmiazó, a tenyésztés kezdeten 6,0 és 7,5 közötti pH értékű táptalajon ,25 és ,35 C° közötti hőmérsékleten tenyésztjük, a tenyésztés során termelt 19 402 R. P. antibiotikumot elkülönítjük oly módon, hogy a fermentOevet 5-nél kisebb pH-inál magszűrjük, a szűrőlepényt vizes alkohollal 3 és 7 közötti pH-nál extraháljuk, és a vizes alkoholos kivonat koncentrálása után a terméket hűtéssel és/vagy egy rosszabbul oldó oldószer hozzáadásával kicsapjuk, a kapott 19 402 R. P. antibiotikumot ismert módon megtisztítjuk, és adott esetben átalakítjuk alkálifémsóivá. 1 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. "007881. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 5
