157327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 19 402 R.P. antibiotikum előállítására
157327 Vizsgált baktérium Minimális bafcteriosztatikus koncentráció jitg/cm3 Escherichia coli, ATCC 9637 30 Shigella dysentariiae, Shiga L pnstitut Pasteur) 70 Salmonella 'paratyphi A, Lacasse (Institut Pasteur) 90 Salmonella sehottrnueileiri piaira-thyphi B) Fougenc (Institut Pasteur) 60 Proteus vulgaris 125 Klebsiella pneumoniae, ATCC 10 031 75 Pseudomonas aeruginosa, Bass törzs (Institut Pasteur) 50 Brucella bironéhiseptioa, CN 387 i( Wellcome Institute) 15 Bruoalla abortus bovis, B 19, 1' Pastiauirella multocida (A 125, Institut Pasteur) 0,8 Reiter-féle treponéma 10 Ezek a vizsgalati eredmények azt mutatják, hogy a 19 402 R. P. különösen a Gram-pozitív baktériumokra fejt ki hatást; hatásossága a Streptococcus hjaemdlyiticus ellen különösen nagy. Viszonylag kevéssé hat a Graan-inegiatív baktériumokra, bár a Neisseria gonoinr'haeae és a Brucella abortus bovis elleni hatásossága figyelemreméltó. Semmi köresztHnezisizienciát nem mutat a következő antibiotikumokkal: penicillin, sztreptomicin, tetraoiklin, klóramfeniifcol, szpiramicin, karbamidin, eritromidin, prisztimamidin és novobiocin. A 19 402 R. P. hatásosságát ellenőriztük in vivo kíséirletiiag Streptococcus, Pneumococcus és Staphylococcus baktériumokkal fertőzött laboratóriumi lállatokon. Különösen hatásosnak bizonyult egereken szübkután befecskendezéssel, hasonlóan igen jó preventív akti vitást mutatott Staphylococcus és Streptococcus fartőzés,sel szemben egereken szübkután vagy intravénás alkalmazásira. A 19 402 R. P. toxicitását főképp egéren tanulmányoztuk. Az 50%-os letalis adagot (DL50) intrapetritaneálisan határoztuk meg. DL50 = 600 mg/kg i.p. Az eredmények azt mutatják, hogy a termék igen kevéssé toxikus. A 19 402 R. P. antibiotikum élőállítása lényegében abban áll, hogy Straptomyoes peruviensist alkalmas táptalajon megfelelő körülmények között tenyésztünk, majd a tenyésztés közben képződött antibiotikumot elkülönítjük. A Streptomyces paruvianisis itenyésztése az 1 259 983 számú francia szabadalom leírásában a 6798 R. P. antibiotikum termelésére ismerte-10 15 40 45 50 55 60 S5 tett anódszeirek szerint törtánik. .. A 19 402 iR. P. antibiotikumot a fermentációs levekből a nem. dializáiható savas antibiotikumok extrahálásária és tisztítására hassanálatos, önmagukban ismert 'módszerek szerint különitbetjülk el, például az 1468 671 számú francia szabadalom leírásában ismertetett módon. A f ermentlé 5 vagy ennél nagyobb pH-n, előnyösen 7 'és 9 pH között szűrhető, de ilyen körülmények között a 19 402 R. P- jelentős része a iszűrőlepányben inarad, úgyhogy azt szintén extrahálni kell iaz aktív termék kinyerésére. Sőt utána a 19 402 R. P. antibiotikumot el kel választani az ugyancsak a szűradékbe került 6798 R. P. antibiotikumtól. Ennélfogva előnyösebb a szűrést 5J nél kisebb pH^mál, előnyösen 4 pH köirül Végezni; ilyen körülinányek között az egész 19 402 R. P. a 20 szűrőlepényben mariad, ahonnan 3 és 7 pH között egy kevés szénlatomos alkohollal, például metanollal extrahálható. Ügy lis eljárhatunk, hogy a tenyászlevet átbotcsátjük egy erősein amomos j'ellegű nagy 25 pomozátású ioncserélő gyantával •töltött oszlopon, majd eluiáljuk egy elektrolitot tartalmazó vizes- alkoholos oldószerrel, például vizes metanollal. Ennák a módszeirneik is hátránya az, hogy végül el kell választani a 19 402 R. P. és a 6798 R. P. 30 antibiotifcumdkat. A 19 402 R. P. nyers antibiotikuirn az említett vizes-alkohiolois oldatokból azok kis térfogatra való koncentrálásával választható ki; a foepárlást csetekemtett nyomás ialatt 40 C°-nál ala-35 csonyabb hőmérsékleten kell végezni. Lehűtésre és/vagy a 19 402 R. P.-t .rosszul oldó oldószer, például vízmentes etanol vagy laoeton hozzáadására a nyers antibiotikum kicsapódik. A 19 402 R. P. antibiotikumot ezután megtisztíthatjuk oly módon, hogy megkötjük egy erős aniotruois jellegű ioncserélő gyantán, majd eluáljuk egy elektrolitot, például nátrium-, ammonium-, kálium-, kalcium- vagy magnéziumkloridot 5—50 ig/iitar koncentrációban tartalmazó vizes-alkoholos oldattal. Ezután laz eluátumöt 40 C-náll alacsonyabb hőmérsékleten csökkentett nyomás alatt koncentráljuk, és a fconcentrátumot regenerált oellulőzhártya segítségével láramló desztillált vízzel szemben dializáljuk. A szervetlen sók és a különféle 'szennyezések a vízibe kerülnek, és a 19 402 R. P; antibiotikum teljes mennyiségében a dializált oldatban mairad. Ezt az oldatot liofilizálva megkapjuk a tisztított 19 402 R. P. antibiotikumot. Még tisztább 19 402 R. P.-hez. juthatunk a használatos hagyományos módszarekkel, például különféle adszorbeáló anyagokon való kromatoigrlafáliással ellenáramú megosztással vagy különféle oldatok közötti megosztással. Különösen alkalmasnak bizonyult az antibiotikum vizes oldatának ikovasavgélen való kromatografálása, és propanol és vizes ammónia elegyével váló etuálása. 3
