157208. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hálós kallikrein-inhibitor előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1968. III. 09. (BA—2040) Német Szövetségi Köztársasag-beli elsőbbsége: 1967. III. 16. (F 51832 IV d/12 p) Közzététel napja: 1969. VII. 23. Megjelent: 1970. IX. 30. 157208 Nemzetközi osztályozás: A 61 k Feltalálók: Rauenbusoh Erioh vegyész, Keller Hans farmakológus, Wuppertal-Elberfeld, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Farbenfabriken Bayer A. G. cég, Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás hálós kallikrein-inhibitor előállítására 1 Mint ismeretes, a proteinek* szerkezetük mélyreható megváltozása nélkül intramolekulárisan összekapcsolhatók dikaíbonsavak iminoétefreivel történő reagáltatás útján. Azt találtuk, hogy a marhaszervekből kivont kallikrein-inhibitor reakcióba léphet a dikarbonsavak iminoétereivel és ékkor összekapcsolódás útján a monomer-termékek mellett a kallikrein-inhilbitQr dimerjei, trimerjei és oligomerjei is keletkeznek. A képződő amidin-származékok farmakológiai hatása abban különbözik a kiindulási anyagétól, hogy a különböző enzimekkel szemben tanúsított gátló tulajdonsága különböző mértékiben megváltozik. E vegyületek a kiindulási anyagétól eltérő farmakológiai tulajdonságokkal rendelkeznek. Például, mint az A táblázatból kitűnik, a «monomertől az oligomer irányába antitripszin^aktivitásuk és a,ntifibrinolitikus hatásuk csökkén, viszont olvadásgátló hatásuk növekszik. A telített alifás dikarbonsavak iminoéterei pl. a barostyánkősav, adlpinsav vagy glutársav iminoéterei lehetnek. A kallikrein-inhibitor és a fentemlített dikarbonsavak iminoétereinek reakcióját célszerűen pH = 10,5 körül, puffer jelenlétében, szobahőmérsékleten, tartós keverés közben hajtjuk végre. A reakcióelegyet gél-szűrésnek vetjük ,2 alá. Ekkor elsőként a nagymolekulájú frakciók -távoznak az oszlopról, míg a kismolekulájú részek visszamaradnák. A frakciókat a molekulanagyság szerint gyűjtjük és célszerűen ioncserélő oszlopon sómentesítjük, ahol a kötött puffer-sók visszamaradnak. Ezután a szűrleteket fagyasztva szárítjuk. 10 1. példa: 0,5 g (77 jumól), marhaszervekből nyert kallikrein-inhibitart 50 ml 0,1 M nátriumfoszfátpuff erben oldunk (pH == 10,5). Az oldathoz 15 szobahőmérsékleten, állandó keverés köziben egy óra alatt 50,5 mg (231 fimól) borostyánkősav-diminometiléter-hidroikloridot adunk. A borostyánkősav-diiminometilétert S. M. McElvain, J. Schroeder: J. Am. Chem. Soc. 71, 40 (1949) 20 módszere szerint állítjuk elő. Az elegyet további egy órán át keverjük, majd vákuumban kb.' 20 ml térfogatra bepároljuk. Az oldatot az adott; esetiben jelenlevő kismennyiségű csapadéktól centrifugatással megtisztítjuk, majd 9 25 cm átmérőjű, 90 cm magas, dextrán-géllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot előzőleg pufferrel egyensúlyba hozzuk. A puffer összetétele, amelyet az elucióhoz is felhasználunk, a következő: 0,02 M nátriumfoszfát, 0,1 30 M nátriumhidroxid, 0,001 M etiléndiamintetra-157208