157077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
11 157077 12 tisztasági fokát szilikagél-lemezeken készített vékonyréteg kromatogrammokon ellenőrizzük a 100-as rendszerben és kloroform-metanol (75:25) rendszerben. A kromatográfiásan egységes frakciókat egyesítettük és lepároltuk. A maradékban még jelenlevő ammóniumacetátot nagy vákuumban, 40 C°-on szublimálással távolítjuk el. 10. H-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Rro-Val-Tyr-Pro-OH (ecetsavas só) 100 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Vaí-Gly-Lys(BOC)r Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys (BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu-t 3 ml 90 %-os trifluórecetsavban feloldunk és 1,5 órán át 25 C°-on állni hagyjuk. Ezután nagymennyiségű éterrel kicsapjuk, leszivatjuk, éterrel mossuk és szárítjuk. A tetrakozapeptid így kapott trifluóracetátj át acetáttá való átalakítás céljából 5 ml vízben oldjuk és gyengén bázikus, acetát alakú ioncserélő (Merck Nr. II oszlopon {'&= 18 mm, 1 = 20 om) szűrjük. Az eluátumot liofilizálva a szabad tetrakozapeptid acetátját kapjuk csaknem színtelen, könnyű por alakjában. 2. példa: 1. Z-Val-Tyr-Pro-NH2 18,8 g Z-Val-Tyr-Pro-OtBu-t 95 ml 90 %-os trifluórecetsavban oldunk és 1 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután szárazra pároljuk és az olajszerű maradékot 100 ml víz hozzáadásával és 0 C°-on eldörzsölve porrá alakítjuk. Szűrés után káliumhidroxid felett súlyállandóságig szárítjuk, majd ecetészter-petroléter elegyből kicsapjuk. Az amorf port (10,01 g) 5,15 ml trietilaminnal együtt 170 ml abszolút tetrahidrofuránban oldjuk, —15 C°-ra hűtjük, és 5 perc alatt 4,44 ml izobutilklórkarbonát 2,5 ml abszolút tetrahidrof uránnal készített oldatával keverjük össze. Ezután 15 percen keresztül —10 C°-on keverjük, majd lassan 107 ml, abszolút ecetészterrel készített 0,64 n ammóniát adunk hozzá és még egy órán át 0 C°-on és 6 órán keresztül 20 C°-on keverjük. Az elegyet nagyon betöményítjük, a ragacsos maradékot 500 ml jégecetben oldjuk, majd vízzel, 2n szódaoldattal és újra vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot ecetészter-petroléter elegyből kétszer kicsapjuk és nagy vákuumban szárítjuk. így 14,4 g amorf port kapunk, ami vékonyrétegkromatográfiás mérések szerint egységes. Szilikagél-lemezeken az alábbi R/értéket kapjuk. R/ kloroform-metanol (9:1) rendszerben 0,35 R/ (43 A) 0,63 2. H-Val-Tyr-Pro-NH2 14.4 g Z-Val-Tyr-Pro-NH2 -t 150 ml metanolban oldunk és 1,5 g 10%-os palládiumos szénnel normál nyomáson, CC>2-abszorpció közben telítettségig hidrogénezzük (kb. 2 óra). A katalizátort leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. Ezután a maradékot 15 ml metanolban és 40 ml ecetészterben feloldjuk, 120 ml petroléter hozzáadásával kicsapjuk, leszűrjük, nagy vákuumban 40 C-on szárítjuk. Így 9,52 g amorf port kapunk, amely cellulóz-lemezeken készített vékonyrétegkromatogrammok szerint egységes. R/ (40) 0,73 R/ (45) 0,72 R/ (54) 0,70 3. Z-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 9,74 g Z-Lys(BOC)-OH-t és 9,52 g H-Val-Tyr-Pro-NH2 -t 40 ml abszolút dimetiltformamidban oldunk és 5,76 g diciklohexilkarbodiimid 100 ml acetonitrillel készített oldatával elegyítjük. 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a levált diciklohexilkarbamidot leszűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. A szilárd, habszerű maradékot ecetészter-petroléter elegyből kétszer kicsapjuk, így 16,02 g amorf tetrapeptidszármazékot kapunk, amely szilikagéllemezeken készített vékonyrétegkromatogrammokon az alábbi R/-jértékeket mutatja: R/ kloroform-metanol (9:1) rendszerben 0,29 R/ (43 A) 0,68 4. H-Lys(BOC)-Val-Tyr-Fro-NH2 15.5 g védett tetrapeptidamidot 100 ml metanolban oldunk és 1,5 g 10 %-os palládiumos szén hozzáadása után normál nyomáson telítettségig hidrogénezzük. (Tartam kb. 4 óra) Ezután a katalizátort leszűrjük, a szűrletet szárazra pároljuk, a kapott nyersterméket ezt követően 10 ml metanolban és 120 ml jégecetben feloldjuk, 120 ml petroléter hozzáadásával kicsapjuk és nagy vákuumban 40 C°-on szárítjuk. Ily módon 11,9 g amorf port kapunk, amely szilikagélen készített vékonyrétegkromatogrammon az alábbi R/ — értékeket mutatja: R/ kloroform-metanol (9:1) rendszerben 0,08 R/ (43 A) 0,27 5.'Z-Val-Lys<BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 5,28 g Z-Val-OH-t és 3,07 ml trietilamint 50 ml abszolút jégecetben oldunk, —10 C°-ra hűtjük és 4,75 ml izobutilklórkarbonát 5 ml jégecettel készített oldatával elegyítjük. Ezután még 15 percen át —10 C°-on keverjük, majd kb. —5 C°-on 11,87 g H-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-NH2 10 ml dimetilformamiddal készített oldatát adjuk hozzá. Az elegyet 30 percen át 0 C°-on 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
