157077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ACTH-hatású peptidek előállítására
157077 9 10 térfogatra bepároljuk, majd 500 ml éterrel elkeverjük, ekkor a trifluoracetát kikristályosodik. Ezt (24,2 g) 35 ml vízben feloldjuk, az oldat alá 700 ml kloroformot rétegezünk és ke- 5 verés közben 0 C°-on 210 ml telített káliumkarbonát-oldattal elegyítjük. A kloroformos fázisból 16,1 g kristályos dipeptidésztert nyerünk ki 84—85 C°-os olvadásponttal. 4. BOC-Tyr-Ser-Nle-OCHs 10 19,6 g BOC-Tyr-OH-t és 16,1 g H-Ser-Nie-OCH3 -t 350 ml acetonitril és 17,5 ml dimetilformamid eiegyében oldunk, —5 C°-on 15,9 g 15 diciklohexilkarbodiimid 175 ml acetonitrillel készített oldatával összekeverjük és 1 órán át —5 C°-on, majd éjszakán át 0 C°-on keverjük. Ezután a diciklohexilkarbamidot eltávolítjuk, a fent megadott módon mossuk és az oldatot bepároljuk. A védett tripeptidészter átkristá- 20 iyosítás után 143—145 C°-on olvad. 5. H-Tyr-Ser-iNle-OCHa A védett tripeptidészter 27,3 g-ját 82,5 ml 25 metanolos n sósavban feloldjuk, 2 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1,5 1 éterrel elegyítjük. így a szabad tripeptidészter hidroklorid'ját kapjuk^ami átkristályosítás után 218—220 C°-on (bomlás) olvad. ' 30 A hidroklorid 14,2 g-ját 20 ml> vízben feloldjuk, 400 ml kloroformot alárétegezünk és 0 C°-on 100 ml telített káliumkarbonát-oldattal, keverjük Össze. A szabad bázis átkristályosítás 35 után 84—86 C°-on olvad. 6. BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-OCHs 13,4 g H-Tyr-Ser-Nle-OCH-rt 250 ml aceto- 40. nitrilben feloldunk és 15 ml dimetilf or mamid hozzáadása után 7,35 g BOC-D-szerinnel elegyítjük. —5 C°-on 7,45 g diciklohexilkarbodiimid 30 ml acetonitrillel készített oldatát adjuk hozzá és 1 órán át —5 C°-on, majd éjszakán át 45 0 C°-on keverjük. A diciklohexilkarbamidot •' eltávolítjuk, és az oldatot bepároljuk. A védett tetrapeptidészter átkristályosítás után 149—151 CDon (bomlás) olvad. 50 7. BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-NH-NH2 11,65 g tetrapeptidésztert 50 ml metanolban feloldunk, az oldathoz 4,8 ml hidrazinhidrátot adunk és az elegyet 24 órán át szobahőmersék- 55 léten állni hagyjuk. Ezután hozzáadunk 50 ml vizet és addig keverjük, amíg a kocsonyás termék teljesen át nem kristályosodik. Olvadáspont: 205—207 C°. 60 8. BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu:(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH 8,75 g BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nie-NH-NH2 -t 75 ml dimetilf or mamidban feloldunk és keverés (55 közben, —.15 C°-on 2 n hidrogénklorid jégeeetes oldatának 20 ml-ével elegyítjük. 1,65 g tercbutilnitrit hozzáadása után az oldatot 10 percen át —15 C°-on keverjük, majd 5,5 ml trietilaminnal összekeverjük. A BOC-tetrapeptidazid így kapott oldatát cseppenkint 10 g H-Glu-(OtBu)~His-Ph.e-Arg-Try-Gly-OH 225 ml dimetilformamiddal és 12 ml vízzel készített, —10 C°-ra hűtött oldatához adjuk. A reakcióelegyet 20 órán át 0 C°-on keverjük, majd 900 ml vízzel elegyítjük. Az amorf dekapeptidet leszívatjuk és dimetilf ormamid-víz (1:5) eleggyel és acetonitrillel mossuk. Vizes acetonitrilből kicsapjuk és légszárazzá szárítjuk, így 12,9 g tiszta, védett dekapeptidtetrahidrátot kapunk 215—218 C° olvadásponttal (bomlás); [a]20 D = = 18°±i2'0° (c=0,5 piridin-víz (1 : 1) elegyben) A vegyület szilikagélen készített vékonyréteg kromatogrammon egységes. R/(52) = 0,3. 9. BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-i(OtBu)-Hi:S-Phe^Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-P:ro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-LySi(BOC)-Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu 1 g BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-OH-t és 1,05 g H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC) -Lys(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu-t (amelyet oly módon állítunk elő, hogy Z-Lys(BOC)-OH-t H-Lys(BOC)-OCH3-mal kondenzálunk diciklohexilkarbodiimid jelenlétében, a védett dipeptidésztert hidraziddá alakítjuk, az azidmódszer szerint L-prolinnal Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Pro-OH-vá kondenzáljuk ezt H-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu-val diciklokarbodiiimid jelenlétében kondenzáljuk, a kapott oktapeptid-származékíból hidrogén segítségével palládiumos szén jelenlétében lehasítjuk a karbobenzoxicsoportot és az így kapott H-Lys(BOC)Lys(BQC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu-t az 1214 242 sz. német szabadalmi leírásban ismertetett Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH-NH2-vel kondenzáljuk az azidmódszer szerint, vö. 154 656 lajstromszámú szabadalmi leírás 15 ml piridinnel, 1 ml vízzel és 0,47 ml n sósavval összekeverünk. Ezután hozzáadunk 300 mg diciklohexilkarbodümidet, 50 C°-on 3 órán át keverjük, majd még 300 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá és további 6 órán át keverjük 50 C°-on. Ezután kb. 5 ml térfogatra bepároljuk és nagymennyiségű éter hozzáadásával kicsapjuk. Az éterben oldhatatlan port vízzel, eldörzsörjük, leszivatiuk és szárítjuk. Az így kapott nyersterméket előkészítés céljából a metanol-puff er-kloroformszéntetraklorid (10:3:5:4) (puffer: 28,5 ml jégecet + 19,25 g ammóniumacetát 960 ml vízben) oldószer-rendszer 50 ml-es alsó és felső fázisában szuszpendáljuk, több órán át rázzuk, majd szűréssel eltávolítjuk az oldhatatlan részeket. Az oldódó alkotórészeket további tisztítás céljából Craig-megosztásnak veti'ük alá azonos oldószer-rendszerben. Az egyes frakciók 5
