156814. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitetraciklin tisztítására
s 156814 6 számított: C '5(3,22, H 5,69, N 5,65%; tot és számított mennyiségű (1 mólra 3 mól) fortalált: C 53,23, H 5,62, N 5,63%. mamid hozzáadásával 30 C° körüli hőmérsékleten oldatba visszük. Az oldatot szükség esetén derítve, vagy anélkül szűrjük és 2—3-szoros tér-5 fogatú vízbe folyatjuk, az oxitetraciklin-dihidrát kikristályosítáisa céljából. A kikristályosodott oxitetraciklin-dihidrátot minden esetben a szokásos módon dolgozzuk fel, vízzel mosva acetonnal fedve és alacsony hőmér-10 sékleten szárítva. Az oxitetraciklin formamiddal képezett molekula-vegyületen keresztül történő tisztítása igen előnyös és minden esetben jó eredményt biztosít, mert 15 1.) a molekula-vegyület igen kíméletes körülmények között semleges vagy gyengén savanyú (szerves savas) oldatban alacsony hőmérsékleten (40 C° alatt) képezhető, tehát epimerizáció veszélye nem áll fenn; 2o 2.) a molekula-vegyület szelektíven, közel kvantitatíve képződik az oxitetraciklinből és kristályos állapotban jól izolálható; 3.) a molekula-vegyület, ill. annak hangyasavas, ecetsavas, borkősavas sói ammónsókat tar-25 talmazó metilalkoholban szobahőmérsékleten oldatba vihetők és szűréssel — szükség esetén derítéssel és szűréssel •— tovább tisztíthatók; 4.) a molekula-vegyület metanolos oldatából víz hatására — célszerűen az oldat vízbe folya^n tásával — az oxitetraciklin-dihidrát folyamatosan kristályosítható ki, ellentétben az eddig ismert tisztítási eljárásokkal, ahol az oxitetraciklin-dihidrát kicsapás után, zárványképződés veszélye mellett kristályosodik át; 5.) az ismertetett eljárással az oxitetraciklin (a már jelenlévő epimerektől eltekintve) gyakorlatilag minden szennyezéstől igen csekély (pár százalékos) veszteség árán megszabadítható. Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük anélkül, hogy azt a példákra korlátoznánk. A biológiai aktivitás minden példában vízmentes bázisra értendő. B pumilus-sal titrálva „large plate" módszerrel. OTC-CHsDH, op.: 171—4 C° (boml.); {«]25 D +74° (DMF, c = 1); C23 H28N 2 Oio-re (M:492,47) számított: C 56,09, H 5,73, N 5,69%; talált: C 55,93, H 5,65, N 5,70%. , OTC-HoO, op.: 174—5 C° (boml.); [a]25 D +79,5° (DMF, c = 1); C2 2H 26 N 2 Oio-re (M:478,45) számított: C 55,22, H 5,42, N 5,86%; talált: C 55,32, H 5,42, N 5,00%. A találmányunk tárgyát képező eljárás különösen előnyösen megvalósítható foganatosítási módjait az alábbiakban részletesebben írjuk le: Oxitetraciklin-dihidrátot kétszeres mennyiségű formamidban szuszpendálunk és megfelelő mennyiségű hangyasav, esetsav, ill. borkősav hozzáadása után,, vagy anélkül 30—40 C°-ra melegítünk, mikoris átmenetileg oldat keletkezik. Az oldat stabilizálása céljából enyhe redukáló szereket — célszerűen nátriumbiszulfitot, és/vagy katalitikus mennyiségű stabilizálókat — előnyösen xantént, vagy akridint •— alkalmazunk. Mintegy félórás melegítés után kialakul a molekula-vegyület, melynek kikristályosodását erőteljes hűtéssel tesszük teljessé. A kristályos molekula-vegyületet szűréssel izoláljuk, alacsony szénatomszámú alkohollal — előnyösen metanollal, etanolial, vagy izopropanollal — mossuk és szárítás után, vagy anélkül felhasználjuk a tiszta oxitetraciklin-dihidrát előállítására. Ebből a célból a molekula-vegyületet vízben szuszpendálva megbontjuk, vagy ammóniumsók — előnyösen ammónklorid, vagy ammónacetát — ímetilalkoholos oldatában oldjuk és szűrés után az oldatot vízzel hígítjuk, ül. még előnyösebben a kapott oldatot vízbe folyatjuk. Semleges molekula-vegyület alkalmazása esetén a rendszert szerves savval — céls^rűen ecetsavval — ienyhén megsavanyítjuk. A molekula-vegyület borkősavas sójának használata esetén a sót ammóniumacetát-tartalmú metanolban oldjuk és a kiváló ammónium-bitartaráttói az oldatot szűréssel elválasztjuk, majd vízbe folyatjuk. Minden esetben magas biológiai aktivitású, kiváló színmmőségű és megfelelő litersúlyú oxitetriaciklin-dihidráthoz jutunk, ami az eljárás kellő szelektivitását bizonyítja. A termék magas optikai forgatóképessége pedig az epimerizáció teljes elmaradását igazolja. Ha a tisztítandó oxitetraciklin-dihidrát biológiai aktivitása, valamint színminősége megfelelő és csak a litersúly javítása a cél, nincs szükség a formamiddal képzett molekula-vegyület ill. ennek sói kristályos állapotban való izolálására, hanem úgy járhatunk el, hogy a molekula-vegyületet magában a metilalkoholos oldatban képezzük. Ebből a célból 5% ammóniumacetátvagy 3% ammóniumklorid-tartalmú metilalkoholban szuszpendáljuk az oxitetraciklin-dihidrá-Példák: 1. 111,0 g oxitetraciklin-dihidrátot (bázistartalom: 100 g) 200 ml formamidban szuszpendálunk és 0,1 g xantén + 0,5 ml 40%-os nátriumbiszulfit-oldat hozzáadása után 35 C°-ra melegítjük. Az anyag rövid időre átmenetileg oldatba megy. 1/2 órán át 30—40 C°^on kevertetjük, majd a molekula-vegyület kristályosodásának megindulása után keverés közben visazahűtjük. Éjszakán át 0 C°-on tartjuk, majd keverés közben —5 C°ra hűtve a kristályokat lenuccsoljuk, kevés anyalúggal mossuk és 40 ml jéghideg metanollal fedjük (ez a színes anyalúgot kiszorítja). Vákuumban 40 C°-on szárítjuk: 126,0 g sárgászöld színű, zömök kristályok, op.: 139—140 C°. (A kitermelés 97,8% a bázisra számolva.) 2. 500 ml metanolban 25,0 g ammóniumacetátot és 1,0 g aszikorbinsavat oldunk. Hozzáadunk 100,0 g OTC-3HCONH2 -t (1. az 1. példát) és 10 ml jégecet becsepegtetése után szobahőmérsékleten kevertetjük; kb. 1/4 óra alatt kristály-10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
