156802. lajstromszámú szabadalom • Eljárás grizeofulvin antibiotikum előállítására

3 156802 4 A második lépésben a szén-nitrogén arány legalább 80:1, célszerűen mintegy 80:1 = 100:1 és a pH értéke 6,8=7,5. Részletesen kifej etve a találmány szerinti eljárás első lépésében aerob viszonyok között tenyésztünk egy mikroorgan izmust, az ún. „első lépési mikroorganizmust", amely képes egy szénhidrogénen, az ún. „első lépési szénhidrogénen" tenyészni, amikor is a tenyésztést az első szénhidrogén jelenlétében, a mikroorganizmus által nem asszimilált más szénhidrogének jelenlétében vagy távollétében és egy vizes táptalaj jelenlétében végezzük; az elhasznált vizes táptalaj izomét elváliaisizíjuk a miikrooirganizmustól; a használt vizes táptalajt vagy annak egy részét egy szénhidrogénnel, az ún. „második lépési szénhidrogénnel" együtt átvisszük egy tenyésztő lépésbe, amelyben egy mikroorganizmus antibiotikumot termelő törzsét, az ún. „második lépési mikroorganizmust" részben vagy egészben szénhidrogénekből vagy egészben nem-szenhidrogén szerves vegyületekből álló tápanyag jelenlétében tenyésztjük, majd adott esetben szénhidrogénes közeget adva a tenyészet termékéhez, abból elkülönítünk egy antibiotikumot tartalmazó szénhidrogén-frakciót, amikor is a második lépési szénhidrogén teljesen vagy részben az első lépésből származó asszimilálatlan szénhidrogént vagy teljesen vagy részben hozzáadott szénhidrogént tartalmaz. Célszerűen mind az első, mind a második lépési szénhidrogénekként szénhidrogének elegyeit alkalmazzuk. Alkalmas elegyek azonosak vagy különbözők lehetnek a két lépésben, és a fentebb leírt szénhidrogén tápanyagokból állhatnak. Előnyösen az „első lépési szénhidrogén" szénhidrogének elegye, és előnyösen ezt az „első lépési szénhidrogént" és az első és második lépési mikroorganizmust oly módon választjuk meg, hogy az első mikroorganizmus csak egy részét képes az első lépési szénhidrogénnek asszimilálni; a második lépési mikroorganizmus pedig legalább egy részét képes asszimilálni annak az első lépési szénhidrogénnek, amelyet az első lépési mikroorganizmus nem képes asszimilálni. Alkalmas első lépési mikroorganizmus egy élesztő; alkalmas élesztő egy Candida nembeli élesztőgomba. Előnyösen az élesztő a Candida tropicalis vagy Candida lipolytica törzse. Ha kívánjuk, a mikroorganizmus egy baktérium lehet. Példaképpen az „első lépési szénhidrogén" egy gázolaj párlat lehet, az első lépési mikroorganizmus Candida lipolytica vagy C. tropicalis, a második lépési mikroorganizmus pedig a Penicillium grizeofulvum vagy P. patulum alkalmas törzse. Kívánság esetén azonban az első lépés olyan körülmények között hajtható végre, hogy az asszimilálható szénhidrogéneknek csak egy része asszimilálódik: ebben az esetben az első és a második lépési mikroorganizmus úgy választható meg, hogy képes legyen asszimilálni ugyanazt a tápanyagot. A második lépési mikroorganizmust előnyösen egy előtenyésztőből juttatjuk a második lépésbe. 10 15 20 25 Az előtenyésztésre szénhidrogén tápanyagot, nem-szénhidrogén tápanyagot vagy kevert szénhidrogén/nem-szénhidrogén tápanyagot használhatunk, például kukoricalekvár és gázolaj keverékét. A találmány szerinti eljárás céljára alkalmas mikroorganizmusok: PiemeiMrum griiseofulvum Dierak x — ATCC 11 885 Penicillium patulum Bainier — ATCC 10120 Penicillium nigricans (Bain-) Thom — ATCC 9439 Megjegyzendő, hogy bizonyos üzemi körülmények között a mikroorganizmus szénhidrogénfogyasztása olyan nagy lehet, hogy a fölös szénhidrogén mennyisége nem elég a grizeofulvinfeloldására, amely ilyen körülmények között .jelentős részében a vizes fázisba kerül. Ilyen körülmények között kívánatos egy szénhidrogént adni a tenyészet termékéhez, hogy biztosítsuk, hogy minden grizofulvin a szénhidrogén-fázisba menjen át. Ez a szénhidrogén azonos lehet vagy különbözhet a tápanyag-szénhidrogéntől. A szénhidrogén tápanyagokat és/vagy a szénhidrogén-közeget célszerűen azok közül az anyagok közül választhatjuk, amelyeket fentebb alkalmas szénhidrogén tápanyagokként említettünk. Általában a grizeofulvin a szénhidrogén-fázisban, a mikroorganizmus pedig a vizes fázisban gyűlik ősze. A fázisokat célszerűen szűréssel és/vagy centrifugálással választjuk szét. Valamennyi művelet szakaszosan vagy folytonos üzemben végezhető, vagy a szakaszos és a folyamatos műveletek kombinálhatók. A találmány felöleli a fent leírt, mezőgazdasági célra alkalmas, az antibiotikum szénhidrogénes oldatából álló vagy azt tartalmazó keveréket is. Célszerűen ez a keverék a fent leírt típusú mikroorganizmusok egyike által termelt antibiotikumokat tartalmaz. Előnyösen a keverék grizeofulvint tartalmaz. Az antibiotikumot szénhidrogénes oldatban tartalmazó keverék alkalmas mezőgazdasági vegyszerként, különösen szervezeti antibiotikumként. Célszerű a keveréket 0,1—0,4 g/liter, előnyösen kb. 0,25 g/liter antibiotikum/szénhidrogén koncentrációban használjuk. Felhasználható például talajra, levélzetre vagy magvakra szőrt permetként és csávázásra. Alkalmas a szürkepenész (Botrytis cinerea), szár tőr oübadás, Alternaria, Heminthosporium, Fusarium és Oidium gombák ellen. A következő példákban szemléltetjük az eljárás végrehajtását anélkül, hogy a találmányt ezekre kívánnánk korlátozni. 55 1. példa „ A következő összetételű tápanyag és táptalaj keverékből 500 ml-t zsugorított korongos levegőztetővel ellátott 1 literes lombikba töltöttünk (súlyrészek): 60 . kukoricalekvár 48 rész gázolaj 150 rész káliumdihidrogénfoszfát 4 rész káliumklorid 1 rész nyomelemeket tartalmazó 65 vízzel felöntve 1000 részre 35 40 45 50 2