156235. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
19 156235 20 13. példa: 2,0 g kb. 39 600 közepes mólsúlyű poli-L-glutaminsavat mintegy 5,7 ml 10%-os nátriumhidroxidban feloldunk és így a kapott oldat 7,4 pH-ér,tékű. A kapotjt oldatba 4,0 mg D-Ser1 -Gly3 -Lys 7l > ^-./^"^kortikotrophuhexaacetátat és 0,2 mg merthiolátot feloldunk, majd azt desztillált vízzel 10 ml-re kiegészítjük. Az oldatot steril körülmények között szűrjük. Az oldat összetétele 1 ml-re számítva a következő : D-Seri-Glya-Lys^m-^i-a^ -kortikot rapinJ hexaacetát poli-L^glutaminsav nátriumhidroxid ad. pH 7,4 mer tihi ólát desztillált víz ad. 14. példa: A következő komponensekből 0 idó sze r ampullát állítunk elő: 10 4,0 mg IE 200,0 mg 0,02 mg 1,0 ml D-Sari-Glys-Lyßi7 ' 18 -/? 1 -24 ^kortikatropmwhexaaoetát zselatin fenol desztillált víz ad. 15. példa: 2,0 mg 280,0 mg 5,0 mg 1,0 ml D^SerMjlyS-Lys^^-^^-kortikotropin-hexaaoetát slterilen szűrt vizes oldatát aszeptikus körütaények között nátrium-poliflóretilinfoszfáttal és nátriumkloriddal elkeverjük és ampullákba letöltjük, majd liofilizáljuk. Ily módon száraz ampullákat kapunk, amelyek a következő komponenseket tartalmazzák: D-Seri-OlyS-Lysi7 ' 18 -^ 1 -2 *-•kortikotropin-hexaacetát nátrium-poliflóretilinfoszfát (86,5%-os) NaCl Felhasználás előtt a száraz ampullák tartalmát oldószer ampullában elhelyezett 2 ml desztillált vízzel elkeverjük. 16. példa: A 4—15. példákkal analóg módszerrel állítunk elő olyan készítményeket, amelyek adrenokortikotrop hatású pepiidként Pro42 -amid, D-Seri-Gly3-Lys«'18 -J ö 1 -l8 -'kortiilkotropin-Lys 18 -.amidot vagy D-Seri-Gly^Nleí-Lys17 ' 1 ^/? 1 " 24 -k ortikoitropint tartalmaznak. 17. példa: 1. BOC-Tyr-Gly-OCHa 10,12 g BOC-itirozint forrón 45 ml etilaeetát-20 25 30 35 40 ban oldunk, majd 20 C°-ra való lehűtés után 3,84 g glicínHrnetiíészter 10 ml etilacetátban képzett oldatát adjuk hozzá. A reafccióelegyhez 10,4 g diciklohexilkarbodiimidet szilárd formában adagolunk és azt 18 óra hosszat 25 C°-on keverjük. Ezután a reakcióelegyet 0 C9-ra lehűtjük, 30 perc állás után a kivált diciklohexükarbamidot leszűrjük, majd a szűr létből bepárlás ós petroláteres kicsapás után a nyers dipeptidszármazőkot amorf-nyúlós massza formájában izoláljuk. A nyers terméket etilacetát-petroléter öldószerrendszer felhasználásával kicsapással tisztítjuk, majd az előbbi oldószerrendszerből átkristályosítjuk. A termék olvadáspontja 124—125 C°. A szilikagél segítségével végzett vékonyrétegű kromatografálás során a következő Ry értékéket állapítottuk meg: R; (43 A) = 0,65 R/ (iCHCl3 -metanol = 8:2) = 0,68 R; (101) = 0,77 2. H-Tyr-Gly-OCH3-hidroklorid. 2 g BOC-Tyr-Gly-OCHs-ot melegítés közben 20 ml vízmentes etilacetátban oldunk, majd 20 C°-on 20 ml 4 n sósavat adunk hozzá vízmentes etilacetátlos közegben. Néhány perc leforgása után az oldatból csapadék kiválása kezdődik meg. 30 perc állás után a reakcióikeveréket vákuumban kb. 10 ml-re bepároljuk, majd a dipeptid-észter-hídroklorid kicsiapásat 50 ml petrdléter hozzáadásával teljessé tesszük. A nyersterméket homogenizáljuk, leszűrjük, a szűrőn petroléterrel mossuk, majd 30 C°-j on nagyvákuumban szárítjuk. A dipepitidésziter-hidrokloridot higroszkópos por alakjában kapjuk, amelynek olyadáspontjia kb. 110—115 C° (boimlik). A sziliifcagélen végzett vékonyréteges kromatografálás után a következő R/ értékeket 0,2 mg állapítottuk meg: 23,20 mg 45 R/ (43 A) = 0,33 12,28 mg B.f (CHCls-metanol = 8:2) = 0,36 R/ (101) = 0,60 50 55 60 65 3. BOC-D-Ser-Tyr-Gly-OCHs 1,69 g H-Tyr-Gly-OCHs-Mdrakloridot gyenge melegítéssel 10 ml vízmentes dimetilformamidban oldunk, majd 0 C°-ra lehűtjük. Az oldathoz egymást követően 0,84 ml tmetilamint, 1,23 g BOC-D-Ser-OH-t és 1,65 g dieiklohexilfcarbodiimidet adunk. A keveréket 20 óra hosszat 25 C°-on keverjük, ezután még egy óra hosszat 0 C°-on utánkeverést végzünk. A trietilammóniumklorid ós diciklohexil'karibamid kivált keverékét leszűrjük, a szűrletet bepároljuk, míg olajos maradékot kapunk. 30 ml etilacetát és 100 ml petroléter hozzáadása után a nyersterméket kenőcsös massza alakjában leválasztjuk. Előtisztítás céljából a nyersterméket ismét me-10
