156235. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására

23 A termék szilikagélen végzett vékonyrétegű kramatograf álása után az alábbi R/-értékeket állapítottuk meg: R/ (52 A) = 0,3—0,4 5 R/ (101) = 0,6—0,7 8. BOC-D-Ser-Tyr-Gly-Nle-Glu(OtBu)^His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-(BOC)-Pro-Val-Gly-Lis(BOC)-Lys(BOC)-Ly,s(BOC)-Ly9(BOC)- 10 -Pro-Val-Lyg(BOC)-Vial-Tyr-Pro-OtiBu. 300 mg BOC-D-Ser-Tyr-Gly-Nle-Glut(OtBu)-His-Phie-Arg-TrynGly-OH és 310 mg H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lysi(BOC)-Lys- 15 (BOC)-Lysi(BOC)-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr-Pro-OtBu keverékét 6 ml piridinben, 0,5 ml vízben és 0,5 ml 1 n sósavban feloldjuk. Ezután 0,75 ml piridinben 100 mg diciklöhexilkarbodiimidet adunk hozzá és az elegyet 5 óra 20 hosszat 45—«50 C°-on keverjük. Ezután még további 75 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá és az elegyet éjjelen át 45 C°-on keverjük. A kondenzációs termékből és diciklohexilkarbamidból álló keveréket összesen 75 ml víz 25 hozzáadásaival kicsapjuk, szűrjük és szárítjuk. A dicikldhexilkarbaniid elkülönítése céljából kétszer egymást követően a reakcióterméket etanolban forrón szuszpendáljuk, illetve részben feloldjuk, majd benzol és petroléter hozzáadá- 30 sával ismét kicsapjuk. Az így előtisztított reakcióteirméket az 1. példa szerint ellenáramú megosztással tisztítjuk, 10:3:5:4 arányú metanol-puf fer^klorof orm-széntetraklorid (puffer: 28,5 ml jégeoet+19,25 g ammóniumaíoatát 960 ml 35 vízben) didószerrendszerből. 120 megosztási lépés után a tiszta, védett tetrakozapeptidet a 46—58 frakciókból kinyerjük (megosztási szám K = 0,82). Szilikagél lemezeken végzett vékonyrétegű kromatografálás után a védett peptid- 40 származék Rf-értékei a következők: R/ (100) = 0,61 R/ (kloroform-metanol 75:25) = 0,41 45 9. H-D-Ser-Tyr-Gly-Nle-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Lys-Lys-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-OH (ecetsavas só). 50 A védett peptid védőcsoportjainak lehasitását és a trifluorecetsavas sónak ecetsavas sóvá történő átalakítását az 1. példa szerinti eljárással végezzük. A szabad tetrakozapeptid papírelektroforézise során (piridinacetát-puffer, 55 pH = 6,35; futtatási idő 1 óra; 2.000 V) 8,5 cm-t vándorol a katód fölé. Az alumíniumoxidon végzett vékonyrétegű kromatografálás során 101 oldószer-rendszeriben a tapasztalt R/-érték 0,41. 60 Szabadalmi igénypontok: 1. A 153 664 lajstromszámú törzsszabadalom 1. igénypontja szerinti eljárás továbbfej lesz- 65 24 tése új ACTH-hatású peptidek előállítására, amelyek során legalább az •N-lániovégig a természetes adrenokoirtikotrop hormonok teljes szekvenciájával rendelkező, — azonban első aminosavként D-Jsonfigurációjú aminosavát tartalmazó ACTH-hatású peptidek — amelyben egyes aminosavak 'más természetes ohaminosavákká lehetnek kicserélve — amino- és karboxilos védőcsqportjait lehasítjuk, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként olyan védett peptidekét használunk, amelyek első aminosavként D-^szerint, harmadik aminosavként glicint, míg 17- és 18-helyzetű aminosavként pedig L-lizint tartalmaznak, majd a védőcsoportok lehasítása után, adott esetben, a kapott vegyületeket savas addiciós sókká, származékokká vagy komplexekké átalakítjuk. (Elsőbbsége: 1966. aktober 7.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kivitéli módja, azzal jellemezve, hogy a természetes adrendkortikotrop hormonok láncvégi nitrogénatomjátől számítva 18—39 aminosavat tartalmazó védett peptidekét használjuk kimdulóanyagkénit, (Elsőbbsége: 1966. október 7.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az ACTH láncvégi nitrogénatomjától számítva 18—25 aminosavat tartalmazó védett peptidekét használjuk kiindulóanyagként. (Elsőbbsége: 1966. október 7). 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként olyan védett peptidekét használunk, amelyekben a negyedik N-terminális aminosav norvalinnal vagy norleucinnial és/vagy az ötödik aminosav glutaminnal és/vagy a 25. aminosav valinnal van kicserélve. (Elsőbbsége: 1966. október 7.) 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy védett tetrakozapeptidekből indulunk ki. (Elsőbbsége: 1966. október 7.) . 6. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként védett oktapeptidet használunk. (Elsőbbsége: 1966. október 7.) 7. Az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként olyan peptidekét használunk, amelyek láncvégi szénatomihoz kapcsolt karboxilcsoportja amidálva van. (Elsőbbsége: 1966. október 7.) 8. Az 1—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy az aminocsoportok védőcsoportjaiként terc.-butiloxikarbonil-csoportokat használunk. (Elsőbbsége: 1966. október 7.) 9. Az 1—8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy a karlboxil^csoportok védőcsoportjaiként terc.-butilészter-csaportokat használunk. (Elsőbbsége: 1966. október 7.) 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli módja, azzal jellemezve, hogy kiindulóanyagként D-'szeril-L-tirozil-nglicil-L-jmetionil-L-glutamil-L^iiisztidil-L-ifenilalanil-L^arginil-L-triptofil-12