156157. lajstromszámú szabadalom • Eljárás mikofenolsav előállítására
3 mg asszimilálható nitrogénforrás segíti elő abban az időpontban, mikor a initrogénfoiTás éppen elhasználódott. Megjegyezzük, ihogy a táptalaj a találmányunk szerinti eljárást jellemző magnéziumforráson kívül legalábbis az eljárás kezdeti szakaszában lényeges elem-forrásokat, azaz szén-, nitrogén-, foszfor-, kén- és káliumforrásokat is tartalmaz. A táptalaj általában kis mennyiségben ún. nyomelemeket (pl. vasat, mangánt, cinket, molibdént és rezet) is tartalmaz. A szénfonrás valamely cukor (pl. szaharóz vagy glukóz), valamely többértékű alkohol (plglicerin) vagy észtere, valamely poliszasharid (pl. keményítő) vagy növényi olaj lehet. Nitrogénforrásként szervetlen vagy szerves nitrogénforrások alkalmazhatók. Szervetlen nitrogénforrásként pl. ammóniumsókat vagy nitrátokat használhatunk (mint pl. ammóniumnitrát, ammóniumtartarát, ammóniumszulfát, ammóniumfoszfát, nátriumnitrát, káliumnitrát és kalciumnitrát). Szerves nitrogénforrásként pl. az alábbi anyagok alkalmazhatók: aminosavak (pl. glicin), mag-lisztek (pl. gyapotmag-liszt), kukoricalekvár, pepton, karbamid, élesztőextrakt és húsextraktok. Foszfor-, kén- és káliumforrásként pl. káliumdihidrogénfoszfát, valamely szulfát és káliumklorid alkalmazható. A találmányunk tárgyát képező eljárás egyik foganatosítási módja szerint a fermentációt ún. „kiegyensúlyozatlan" táptalajon végezzük el. Ez esetben a táptalajban a különböző komponensek olyan mennyiségben vannak jelen, hogy az eljárás egy közbenső fázisában az egyik lényeges elem forrása (kivéve a 'magnéziumforrást) — pl. a nitrogén- vagy a szén-forrás — már akkor elfogy, amikor a többi lényeges elem-források még jelen vannak. Előnyösen járhatunk el oly módon, hogy először a nitrogén-forrás merül ki; ezt pl. oly módon érhetjük el, hogy a fenti eljárásnál alkalmazott táptalaj 1—300 g/l szén-forrást (pl. 100 g/l glukózt) és 0,01—10 g/l, pl. 0,65 g/l elemi nitrogénben kifejezett nitrogén-forrást tartalmaz. A találmányunk tárgyát képező eljárásnál olyan „kiegyensúlyozatlan" táptalajt alkalmazva, melyben először a nitrogén-forrás merül ki, jobb niikofenolsav-kitiermeléseket kaptunk, mint a „kiegyensúlyozott" táptalaj (ez olyan táptalaj, amelyben a különböző komponensek lényegében egyszerre fogynak el), vagy az olyan „kiegyensúlyozatlan" táptalaj esetében, melyben a szénforrás fogy el a többi tápanyag előtt. A találmányunk szerinti eljárás egyik foganatosítási módja szerint olyan „kiegyensúlyozatlan" táptalajt alkalmazunk, melyben először valamely nem-szén- és nem-magnéziumforrás fogy el (pl. a nitrogén-forrás) olyan időpontban, amikor a táptalajban bizonyos mennyiségű szénforrás még jelen van, és ezután a szén-szükségletet a táptalajhoz való szén-forrás hozzáadásával tartjuk fenn vagy fokozzuk. A pótlólagos szén-forrást folyamatosan vagy szakaszosan adagolhatjuk be. 4 A fermentáció befejezése után a mikofeinolsavat vagy sóit a fermentációs közegből a szokásos módon vagy függő, 27.161/67 sz. brit szabadalmi bejelentésünkben leírt javított módszer-5 rel izolálhatjuk. Ez utóbbi esetben a teljes szüretien fermentlé pH-ját szűrés előtt pl. valamely alkálifémhidroxiddal 10—11 értékre beállítjuk. A szűrletet a mosóvizekkel együtt ezután megfelelő oldószerrel vagy oldószer elegy-10 gyei lúgos vagy savas pH mellett extraháljuk. A találmányunk tárgyát képező eljárás szerint a mikofenolsavat kívánt esetben valamely megfelelő sójává alakíthatjuk. 15 A sók nem-toxikus gyógyászatilag alkalmas kationt tartalmazó sók (pl. alkálifémekkel, mint nátriummal, vagy alkáliföldfémekkel képezett sók vagy ammóniumsók) vagy nem-toxikus gyógyászatilag alkalmas kationt szolgáltató szer-20 ves bázisokkal képezett sók lehetnek. Megjegyezzük, hogy a sóképzésben a mikofenolsav karboxi-csoportja egyedül (pl. mononátriumsók), valamint karboxil-csoportja és hidroxil-csoportja együttesen is résztvehet (dinátriumsók). A 25 fenti sók a mikofenolsavból a szokásos módszerekkel állíthatók elő. Találmányunk tárgya továbbá eljárás a mikofenolsav (II) általános képletű észtereinek előállítására (mely képletben R jelentése alkil-30 -gyök, kivéve etil-gyök). R előnyösen legfeljebb 6 szénatomot tartalmazó alkil-gyököt (kivéve az etil-gyök), pl. metil-gyököt képvisel. 35 Azt találtuk, hogy a fenti észtereket a mikofenolsav észterezése útján állíthatjuk elő. Az észterezést pl. oly módon hajthatjuk végre, hogy a mikofenolsavat szokásos módszerekkel 40 valamely mikofenolsavhalogeniddé alakítjuk (pl. mikofenolsav és tionilklorid reakciója útján), majd a halogemdet valamely R-OH képletű alkohollal reagáltatjuk (mely képletben R jelentése a fent megadott). Az észterek — pl. a 45 metil-észter — alternatív módon a mikofenolsav és valamely megfelelő diazoalkán (pl. diazometán) reakciója útján is előállíthatók. Eljárásunk további részleteit a példákban ismertetjük, anélkül, hogy találmányunkat a 50 páldákra korlátoznánk. A példákban a koncentrációt súly/téri.%-ban vagy metrikus ekvivalensekben — pl. g/ml vagy 1/1 — adjuk meg. 1. példa: 55 Az alábbi összetételű táptalajt készítettük el: per liter 60 Glukóz 100 g NH4 N0 3 3,72 g KH2 P0 4 5,0 g MgS04 -7H 2 0 1,0 g Nyomelem-koncentrátum 2,0 ml 65 Desztillált vízzel 1 literre hígítva. 2
