156058. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11 béta-hidroxiszteroidok előállítására
7 NMR-spektrum: maximumok: 0,96, 1,47, 2,86, 3,(28, 4,28, 4,150 és 5,74 ppm-nél (standardként tetrametilszilánt használva). A kiindulási anyagiként használt H7ia,!2il-díhidroxi-4-pregnén-3,2i0i-dion-Jl7^aoetát a 17,'2ilorto-észteren keresztül állítható elő a Gardi, R. és munkatársai által leírt módon [ld. Gazz. chim. ital. 93, 4311—«4)50 (1,903)]. 2. példa: Az 1. példában leírt módon fermentációs táptalajt készítünk, amely literenként 7 g, száraz anyagra számított kukoricalekvárt, 7 g glükózt és 3 g szójabab-lisztet tartalmazó csapvizes oldat. A kultúrát 10 órán át fejlődni hagyjuk, ezután S-17a,!2il-diaoetát vizes szuszpenzió ját adjuk hozzá 500 mg/l koncentrációban. 36 órán át 29 C°-on végzett inkubálás után a szutosztrátum teljesen gyakorlatilag csak hidrokortizonná és hidrokortizon-17«^acetáttá alakul. A terméket az 1. példa szerinti módon dolgozzuk fel. Így tiszta hidrokortizont kapunk 87,4% hozammal. 3. példa: Curvularia lunata oltóanyagot készítünk az 1. példa szerinti módion. Ezt használjuk a fő fermentációs táptalaj előállítására '(5%-os beoltás) 10 db 2000 cm3 -es Erlenmeyer rázólombikban, ezek mindegyikében 500 cm3 , literenként 5 g száraz anyagra számított kukoiricalekvárt és 5 g glükózt tartalmazó vizes oldat van, amelynek a pH-ját 6,8-ra alítottuk be nátriumhidroxid oldattal, majd sterilizáltuk. A lombikokat 26 C°-on, forgó rázógépen rázzuk (2510 percenkénti fordulatszámimai). 18 órán át tartó növekedés után 250« mg S-li7a-propiionát szuszpenziójának 5 em3 -ét adjuk mindegyik lombikba. Ezután a kultúrákat 24 órán át a fenti körülrnények között inkubáljiuk, a pH-t azonos értéken (fcb. 6) tartjuk. Papírkromatogrammokból kitűnik, hogy a szubsztrátum teljesen F^liíoE-pröpionáttá és egy kis mennyiségű F-vegyületté alakult. A kultúrákat szűrés nélkül egyenlő térfogatmenynyiségű metilizobutilketonnal extraháljuk. Az extraktumot csökkentett nyomáson kb. 1 literre bebepároljuk és 100 cm3 0,il n nátriumhidroxid oldattal és 3X100 cm3 desztillált vízzel mossuk. A mosott extraktumot aktív szénnel kezeljük, majd cs«ökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot kis mennyiségű oldhatatlan anyagtól eltekintve 50 cm3 metanolban oldjuk. Az oldat térfogatát metanollal 250 cm3 -íre egészítjük ki és az oldatot nitrogénnel telítjük. Ezt követően 25 cm3 , előzőleg nitrogénnel telített metanolos 0,1 n nátriummetilát oldatot adunk hozzá. Az oldatot 1 órán át szobahőmérsékleten nitrogén atmoszféráiban keverjük, majd 3 cm3 n ecetsavval semlegesítjük. Papírkromatoigraimok-8 tool kitűnik, ho«gy az o«ldat F-vegyületet és kis mennyiségű szennyezéseket tartalmaz. Az oldatot csökkentett nyomáson bepároljuk, így kristályos maradékot kapunk, ezt 10 cm3 diklór-5 «etánból átkiristályosítjuk. így l,ß g kristályos terméket nyerünik, amely a papírkromatogramoik szerint F-vegyületből és kis mennyiségű poláris szennyezésből áll. Ezt a terméket kib. 5 cm3 metanolból kristályosítjuk át, ilyen módon 1,157 10 g gyakorlatilag tiszta F-vegyületet kapunk (ez az elméleti hozam 70%^a), Az anyag infravörös spektruma azon«os az F-vegyületével. A kiindulási anyagként alkalmazott S^l'7ia•^propionát Gardi és munkatársainak módszere 15 szerint állítható elő (ld. uo.). Az anyag tulajdonságai a következők: Olvadáspont: 126—129 C°; [wjD = 40°, (c = 1, kloroform.) 20 Elemzési eredmények: «számított C 71,61%, H 8,5)1%, talált C 71,08%,, H 8,44%. IR-spektrum: 25 sávok: 3500, 17312, 17«li3, 1656 és 1617 cm-i-nél. NMR-spektrum: maximumok: 0,70, 1,120, 1,13 (triplet), 2,30 (quadruplet), 3,18 (triplet), 4,25 SO (doublet) 5,74 ppm-nél. 4. példa: Curvularia lunata o«ltóanyagot készítünk az 35 1. példa szerinti módon, és ezt használjuk a fő fermentációs táptalaj élőállítására 500 cm3 -es, 100 cm3 a 3. példában leírt módon készített táptalajt tartalmazó Erlenmeyer-lombikokban rázva (5%-os beoltás). Beoltás után a lombikokat 40 az említett példa szerinti körülmények között rázzuk. 18 órán át tartó növekedés után 25 mg S-lí7a,2ll-diprop:ionát vizes szuszpenziójáinak 1 cm3 -ét adjuk mindegyik lo«mbikba. A kultúrák pH-ját különböző értékekre állítjuk be, és to-45 vábbi 48 órán át a fenti körülmények között inkubáljiuk. A reakciót különböző időpontokban megállítjuk oly módon, hogy a kultúrát metilizobutilketonnal extraháljuk, és papír- valamint vé-50 konyrétegkromatográfiás úton meghatározzuk az extraktumok összetételét a képződött észter (nitrogén atmoszférában alkoholos alkálifémhidroxid oldattal végzett) szappanoslításával öszszekapcsoilva. 7,6<—«8,5 pH értéknél úgy látszik, 55 hogy a szutosztrátum 48 óra alatt teljesen poláris anyag nyomokat tartalmazó F-vegyületté alakult (az S-íl«7ia-ipiropionáton és F-T7a-piropionátan keresztül). 7,5 alatti pH-értékeknél F-lffoc-propionát képződik. 60 A kiindulási anyagként használt SJ 17a,2ll-dipropionátot úgy állítjuk elő, hogy az S-47a-propionát 2!l-es helyzetben levő hidroxilcsoportját pyridines közegben propionsavanhidriddel észte-65 rezzük. 4
