156058. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 11 béta-hidroxiszteroidok előállítására
5 kultúrából és ha szükséges, a micéHumból. Oldószerként előnyösen metilénkloridot, etilénkloridot vagy metilizofbutilketont alkalmazunk. Az extraktumot kis térfogatra, vagy szárazra is bepárolhatjuk. 5 Ezt követően a kristályos vagy nem-kristályos maradékot szükség esetén kémiai módszerek segítségével a kívánt 17a-hl idr,oxiszteroiddá alakítjuk. így a • ll'/J-hidroxiszteroidok 17a-észtereit líl/?,17!a-dihidroxi-származékoikká alakít- io hatjuk; ha az acilcsopoirtot nátriumalkoholátnak alkanollal, így .metanollal vagy etanollal készített oldatával eltávolítjuk. Egyéb megfelelő származékot a hagyományos módszerekkel alakíthatunk a kívánt vegyületté. A végtermék vé- 15 gül egyszerű kristályosítással tiszta állapotban elkülöníthető. A találmány szarinti eljárás foganatosítására az alábbi kiviteli példákat adjuk meg. 20 1. példa: Oltóanyag készítés céljából 2 db, egyenként 500 cm3 táptalajt tartalmazó 20010 cm 3 -es Erlenmeyer-lombik tartalmát zaibliszt-agar táptalajon 25 tenyésztett Curvulariá lunata kultúrával oltjuk be. A táptalaj literenként 20 g, száraz anyagra számított kukaricalekvárt és 20 g glükózt tartalmazó vizes oldatból áll, amelynek pH-ját 2 n nátriumhidroxid oldattal 6,5-re állí- so tottuk be, majd 20 percen át 1120 C°-on sterilizáltuk. Ezután a lombikokat 46 órán át, 20 C°on, forgó rázógépen rázzuk (250 percenkénti fordulatszámmal). Egy 80 l-es oltóedény tartalmát beoltjuk a 35 kapott oltókultúra 1000 ml-ével. Ez az oltóedény levegőztető készülékkel van felszerelve, és olyan táptalajt tartalmaz, amely literenként 5 g száraz anyagra számított kukoricalekvárt és 5 g glükózt tartalmazó vizes oldat, amelynek pH- 40 ját nátriumhidroxiddal 6,5-re állítottuk be, majd 30 percen keresztül 120 C°-on sterilizáltuk. A kapott kultúrát 30 órán át, 26 C°-on a fúvófej mellett 0,5 m/perc levegő sebességgel levegőztetjük, majd ezzel oltjuk be a fő fermentációs 45 edény tartalmát. A fő fermentációt egy 81ÖO literes fermento-rban végezzük. A fő .fermentáció táptalaja literenként 40 g száraz anyagra számított kukorica- 5Q lekvárt és 8 g glükózt tartalmazó vizes oldat, amelynek pH-ját nátriumhidroxiddal 6,6-re állítottuk be, majd 30 percen át 120 C°^on sterilizáltuk. A fő kultúrát a fúvófej mellett 0,5 m/perc g5 levegő-sebességgel levegőztetjük, és Rushtonturbinás keverőszerkezettel 250 cm/sec kerületi sebességgel 2:6 C° hőmérsékleten keverjük. (A beoltás 10|0 /o-os). 10' órával a beoltás után 400 g S-17-acetátot adagolunk be vízzel készített fi- 60 nom szuszpenzió alakjában. Papírkromatográfiás vizsgálat szerint 12 órával a szteroid beadagolása után a kiindulási anyag teljes mennyisége egy gyakorlatilag csak hidrokortizonból és hidrokortizon-17oHacetátból álló keverékké alakult. g5 6 Miután a micéliumot leszűrtük, jól átmossuk metilizobutilkeitonnal. A mosóifolyadékokat friss oldószerrel keverve a kultúra szűrletének extrahálására használjuk, az extrakeiót egymást követően háromszor végezzük 0,2 térfogatrész oldószerrel. Az egyesített extraktumofcat csökkentett nyomáson 600 ml-re bepároljuk. Szárítás után 2i76 g kristályos terméket kapunk, ez hidrokortizonból és hidrökortizon-17a-acetátból áll, és kis mennyiségű szennyezést tartalmaz. Az .anyalúgot metilizobutilketoinnal 3600 ml-re hígítjuk, hidegen 360 ml nátriumhidroxiddal mossuk, majd vízzel semlegesre mossuk. Ezután a szerves fázist csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 1200 ml metanolban vesszük fel. A különváló olajos fázist elkülönítjük és kétszer, fél térfogatmemnyiségű metanollal extraháljuk, Az egyesített metanolos oldatokhoz további 9600 ml metanolt adunk, ezután feloldjuk a hidrokortizon és hidroko<rtizon-T7ia-acetát kristályokat (276 g) az oldatban. Az oldatot nitrogénnel telítjük, és szobahőmérsékleten 220 cm3 , nitrogénnel telített metanolos n nátriummetilát oldatot adunk hozzá. Az oldatot 1 órán át nitrogén atmoszférában keverjük, ecetsavval semlegesítjük, és miután a kikristályosodott hidrokortizont melegítéssel feloldottuk, 40 g aktív szenet adunk hozzá. Szűrés után a szűrletet 1100 ml-re bepároljuk. Az elegyet 12 órán át 3 C°-on tartjuk, ezután a hid,rokortiizont leszűrjük, metanollal és Vízzel mossuk, majd 16 órán át 80 C°-on levegő átfúvatással szárítjuk. így 275,4 g hidrokortizont kapunk 2,16—12119 C° olvadásponttal; [a]D = +151°, (e=l, dioxán); E icm — 443, 242. m^-on metanolban. Az anyalúgból további 55,2 g hidrokortizant különíthetünk el kristályosítás útján, így a hozam 88,6%nra nő. A nyers kristályos terméket tiszta hidrokortizon-17ia-aoetát előállítására használhatjuk. Er-» re a célra 200 g nyers kristályt melegítéssel 100 ml metanolban oldunk, majd az oldatot 8,6 cm3 ecetsavval megsavanyítjuk és 20 g aktív szénnel derítjük. A szűrlethez 680 ml vizet adunk, majd lehűtjük az oldatot. A kikristályosodott terméket leszűrjük, 60%-os .metanollal mossuk és szárítjuk. Ezt követően a terméket mégegyszer átkristályosítjuk 60%-os metanolból, majd 200 ml metilizobutilketonból. így 64,il g tiszta hidrokor,tizon-17ia-acetátot nyerünk 232— 234 C° olvadásponttal; [a]D = +52°, (c=l, dioxán); EÍcm =414, 241,6 rn^-on metanolban. Elemzési eredmények: számított C 68,219%, H 7,97%, talált C 68,21%, H 7,89%. Infravörös spektrum: sávok: 31620, 3508, 1735, 1714, 1669, 1620 és 1082 cm_1 -nél. 3
