155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
11 155880 \ 200 mg hidrogénezett dekapeptidet (8. lépés) 2. példa: 5 ml trifluorecetsavban oldunk .és 15 percig hagyjuk szobahőmérsékleten állni. A trifluor- 1. lépés ecetsavat vákuumban ledesztilláljuk, s a maradékot Amberlite-IRA 400 acetátdklusú műgyantán szűrjük át. A vizes oldatot liofilizálással beszárítva 200 mg anyagot nyerünk. Rf6 0,35— 0,40. 10 10. lépés 15 20 BOC^Ser-Try-Ser-Met-Glu(OBuO-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly— —OH-HC1 3,1 g BOC-Ser-,Tyr-Ser-Met-N2 H 3 peptidhidrazidot [B. Iselin és R. Schwyzer: Helv. Ohim. Acta 44, 169 (1961)] feloldunk 15 ml dimetilformamidban és —30 C° hőmérsékleten hozzáadunk 2,35 ml 6 n sósavat, majd 410 mg nátrium-nitrit tömény vizes oldatát. A keletkezett azid-oldatot azonnal hozzáöntjük 3,5 g dekapeptid (8. lépés) és 2,1 ml trietilamin 15 ml dimetilformamidban készült oldatához, melyet előzőleg —20 C°-ra hűtöttünk. A reakcióelegyet 1 óra hosszat —10 C° és —20 C° közötti hőmérsékleten keverjük, majd éjszakán át 0 C° hőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy bepárlása után a maradékot vízzel porrá dörzsöljük és szárítás után szilikagélen kromatog- 3. példa: rafáljuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) elegyben. A főterméket tisztán tartalmazó frak- 1. lépés ciókat összegyűjtjük és bepároljuk. A párlási maradékot 1—2 g piridin-klórhidrátot tartalmazó 20—30 ml metanolban oldjuk fel és vízzel kicsapjuk, szűrjük, vízzel mossuk és szárítjuk. 2,3 g (47%) védett tetradekapeptid-klórhidrátot kapunk. Rf1 0,10—0,15. Analízis: C91 H 1E 40 23 N 22 SCI (1971,68) számított: C 55,4, H 6,85, N 15,65, S 1,6, Cl 1,8; talált: C 55,2, H 6,9, N 15,5, S 1,6, Cl 1,9. BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu')-His-Phe-Arg-Try-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly—NH2 • HC1 197 mg védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa, 10 lépés) feloldunk 0,5 ml dimetilformamidban, mely 5 mg ammóniát tartalmaz, majd 60 mg diciklohexilkarbodiimidet adva hozzá állni hagyjuk éjszakán át szobahőmérsékleten. Az ammónia-adagolást másnap megismételjük és újabb 60 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk a reakcióelegyhez. Két nap után az oldatot peroxidmentes éterrel hígítjuk, a kivált anyagot szűrjük és szihkagéliből készített oszlopon kromatograif áljuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) rendszerben. 150 mg (75%) védett tetradekapeptidamidot nyerünk. Rf1 0,20—0,25. 2. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-25 -Lys-Pro-Val-Gly—NH2 Az 1. példa 11. lépésben megadott módon 100 mg védett tetradekapeptidamid védőcső portjait eltávolítva 60 mg '(70%) szabad tetradekapeptid-30 amidot nyerünk. Rf« 0,55—-0,60. 40 11. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly—OH 200 mg védett tetradekapeptidet (10. lépés) feloldunk 5,0 ml trifluorecetsavban, mely 0,02% merkapto-etanolt is tartalmaz. 20 perc után az oldatot vákuumban bepároljuk és a maradékot 5 ml vízben oldva 5 ml Amberlite IRA—410 ioncserélő gyantából (acetát ciklusban) készített oszlopra öntjük, 5 x 3 ml vízzel mossuk. A vizes oldatokat egyesítjük és liofilizáljuk. 180 mg tetradekapeptidet nyerünk. Rf6 0,45—0,50. 45 50 55 öü Z-Lys(BOC)-^NH2 2,5 g Z-iys(BOC)-ONP aktívésztert feloldunk 25 ml metanolban és 1,5 ml tömény ammónium-hidroxidot adva hozzá éjszakán át állni hagyjuk, majd az oldatot bepároljuk és a kivált kristályokat híg ammóniaoldattal mossuk, végül 20 ml etanol és 30 ml víz elegyéből átkristályosítjuk. 1,35 g (71%) amidot kapunk. Op.: 140—141 C°. Rf* 0,6. Aminosavanalízis: Ser 1,95 (2), Tyr 0,95 (1). Met 1,0 (1), Glü 1,0 (1), His 1,05 (1), Phe 1,0 (1), Arg 0,95 (1), Gly 2,0 (2), Lys 1,05 (1), Pro 0,95 (1), Val 1,05 (1). 65 2. lépés H-Lys(BOC)—NH, 800 mg védett lizinamidot (1. lépés) 40 ml metilalkoholban hidrogénezünk palládium-csontszén katalizátor jelenlétében, a katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk, a maradék bekristályosodik. Termelés 440 mg, (86%). Rf1 0,34. Analízis: Cn H 2 r,N 3 03 (245,33) számított: amid-N 5,7%, talált: amid-N 5,5%. 3. lépés BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu')-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)—NH2 6
