155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
13 40 mg védett lizinamidot és (2. lépés) 197 mg védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa, 10. lépés) 0,5 ml dimetilformamidban oldunk. Az oldathoz 53 mg pentaklórfenolt és 45 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk és két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A l reakcióelegyet peroxidmentes éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szűrjük, éterrel mossuk és szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk. A tiszta főterméket tartalmazó frakciókat egyesítjük és bepároljuk, éterrel eldörzsöljük. -11 120 mg (60%) védett pentadekapeptidamidot nyerünk. Rf1 0,2—0,25. 4. lépés 11 H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-iys-Pro-Val-Gly-Lys—NH2 100 mg védett pentadekapeptidamidot szabad pentadekapeptidamiddá alakítunk az 1. példa 11. lépése szerint. A termelés közel kvantitatív. Rf« 0,45-^0,55. 4. példa: 25 1. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(BOQ—NH2 2,0 g. védett dipeptidésztert [Z-Lys(BOC)-Lys- 30 (BOC)-OMe; R. Schwyzer és W. Rittel: Helv. Chim.Acta 44, 159 (1961)] feloldunk 50 ml metanolban és ammóniagázzal telítjük az oldatot. Két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd bepároljuk. A kristályos maradékot kevés metanolból átkristályosítjuk. 1,6 g (83%) védett dipeptidamidot kapunk. Op.: 160—162 C°. Rf 0,0 (kloroform-metanol — 98:2, ahol az észter 0,20—0,25 Rf értékkel vándorol). 2. lépés. H-Lys(BOC)-Lys-(BOC)^NH2 45 1,0 g védett dipeptidamidot metanol-oldatban hidrogenizálunk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk. A kristályos maradék 0,75 g (kb. 100%) szabad dipeptidamid. Rf1 50 0,7 (a védett vegyületnél 1,0), Rf 0,7. 3. lépés BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBu')-His-Phe- SS -4Arg-Tyr-Gly-Lys'őOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)—NH, 0,5 ml dimetilformamidban feloldunk 197 mg védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa, 60 10. lépés), 60 mg szabad dipeptidamidot (4. példa, 2. lépés), 50 mg pentaklórfenolt és 45 mg diciklohexilkarbodiimidet. Az oldatot két napon át állni hagyjuk szobahőmérsékleten, majd peroxidmentes éterrel hígítjuk. A kivált anya- 55 14 got kiszűrjük és szilikagélből készített oszlopon etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:20:6:11) elegyben kromatografáljuk. A tisztítás végén 120 mg (50%) védett hexadekapeptidamidot nyerünk. Rf1 0,20—0,25. 4. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys—NH2 100 mg védett hexadekapeptidamidot az 1. példa 11. lépése szerint szabad peptiddé alakítunk. 70 mg (kb. 80%) hexadekapeptidamidot nyerünk. Rfs 0,35—0,40. 5. példa: 1. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)—N2 H 3 8,6 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OMe dipeptidésztert [R. Schwyzer és W. Rittel: Helv. Chirn. Acta 44, 159 (1961)] feloldunk 15 ml forró metanolban és 6 ml 75%-os hidrazin-hidráttal <1 órán át forraljuk visszafolyató hűtés közben A reakció végén az oldatot betöményítjük <b •a kristályos maradékot vízzel eldörzsöljük, szárítjuk. A nyert kristályos védett dipeptidhidrazid 7,8 g (90%). Op.: 126—128 C°. Rf« 0,50 0,60 (észternél 1,0). Analízis: C3 oH 50 0 8 N 6 (622,75); számított: N 13,5; talált: N 13,5. 2. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(N02 )—NH 2 a) azid készítése: 3,12 g védett dipeptidhidrazidot feloldunk 50 ml dimetilformamidban c-s —10 C° körüli hőmérsékleten 20 ml 0,5 n sósavat, majd 5,0 ml 1 mólos nátrium-nitrát-oldatot adunk hozzá. 15 percig keverjük —10 C körüli hőmérsékleten, majd 1,0 ml trietilaminnal semlegesítjük az oldatot, hígítjuk 50 ml hűtött kloroformmal és 50 ml vízzel. A kloroformos fázis elválasztása után a vizes részt mé;-' mossuk kloroformmal, majd az egyesített klo^ roform-oldatokat mossuk hideg vízzel, szárítjuk magnéziumszulfáton és az aminő komponenshez szűrjük. b) kapcsolás: 1.5 g <«-nitro-arginin-amid-brómhidrátot [H. Otsuka, K. Inouye, M. Kanayama és F. Shinozaki: Bull. Chem. Soc. Japán 38. 1563 (1965)] feloldunk 10 ml dimetilformamidban és 0,77 ml trietilamin hozzáadása utár; szűrjük hozzá a fenti kloroformos az':d-oldatot majd a kloroformot ledesztilláljuk. A reakcióelegyet állni hagyjuk szobahőmérsékleten éjszakán át. A dimetilformamidot vákuumban le-7
