155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
155880 27 28 Aminosavanalizis: Ala 0,95 (1), Arg 2,05 (2), Asp 1,0 (1), Glu 1,05 (1), Gly 1,0 (1), Lys 2,85 (3), Pro 2,05 (2),Tyr 1,0 (1), Val 2,05 (2). 14. lépés BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBuf )-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)-Val-Tyr(Bu')-Pro-Asp(OBuO-Gly-Ala-Glu(OBu')-OBut 0,986 g védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa 10. lépés), 1,138 g tetradekapeptid-triklórhidrátot (10. példa 13. lépés), 0,226 g pentaklórfenolt és 0,203 g diciklohexilkarbodiimidet feloldunk 3,0 ml dimetilformamidban, mely 50 mg trietilamint is tartalmaz. A reakcióelegyet két napon át hagyjuk állni szobahőmérsékleten, majd peroxidmentes éterrel hígítjuk, a kivált csapadékot szilikagélből készített oszlopon etilacetát-piridin-hangyasav-víz (60 : 20 : 6 : 5,5) eleggyel kromatografáljuk. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük és bepároljuk. A főterméket is tartalmazó többi frakciót külön összegyűjtve, bepárolva és újra kromatografálva további tiszta védett oktakozapeptidhez jutunk. Az együttes hozam 0,85 g (kb. 40%). Rfv 0,17--0,25. 15. lépés H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys-Val-Tyr-Pro-Asp-Gly-Ala-Glu—OH 760 mg védett oktakozapeptidet feloldunk 20 ml 90%-os trifluorecetsavban, mely 0,02% merkaptoetanolt is tartalmaz. Az oldatot állni hagyjuk 15 percig, majd bepároljuk, a maradékot oldjuk 3 ml vízben és ismét bepároljuk. A vizes oldást és bepárlást még egyszer megismételjük. Végül az anyagot oldjuk 5 ml vízben és 20 ml Amberlite IRA—400 acetát ciklusú ioncserélőgyantából készült oszlopra visszük. Az oszlopot 6X5 ml vízzel mossuk, a vizes oldatokat liofilizálással szárítjuk. A nyert oktakozapeptid 580 mg (kb. 90%). Rí" 0,30—0,35. Aminosavanalízis: Asp 1,0 (1), Ser 2,0 (2), Glu 2,03 (2), Pro 3,04 (3), Gly 3,1 (3), Ala 1,05 (1), Val 3,09 (3), Met 0,97 (1), Tyr 2,12 (2), Phe 1,0 (1), His 1,2 (1), Lys 3,9 (4), Arg 2,91 (3). A példákban felsorolt kromatográfiai vizsgálatokhoz használt oldószerelegyek (az Rf-érték kitevőjében jelöltük): 1. etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 : 20 : 6 : 11), 2. etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60 :10 : 3 : 5,5), 3. kloroform-metanol-víz (60 : 38 :10), 4. kloroform-me'anol (9 :1), 5. etilacetát-piridin-hangyasav-víz (40 : 20 : 6 : 5,5), 6. butanol-piridin-ecetsav-víz (30 : 20 : 6 : 24), 7. etilacetát-piridin-hangyasav-víz (60 : 20 : 6 : 5,5), 8. kloroform-metanol-víz (40 :10 : 1), 9. kloroform-metanol-víz (60 : 26 : 5). 5 11. példa: 1. lépés Z-Ala-Gly-Glu(OBu')2 11,9 g Z-Gly—ONSu 170 ml etilacetátos oldatát 0°-ra hűtve 12,2 g H-Glu(OBu')2 60 ml etilacetátos oldatához adjuk hűtés közben. A reakcióelegyet éjszakai állás után N sósavval, 5%-os NaHC03 oldattal, majd vízzel kirázzuk •éj szárítás után az oldószert ledesztilláljuk. Az •olajként visszamaradó Z-Gly-Glu(OBuf ) 2 -t (Elm. C: 61,4%; H: 7,6%; O: 24,9%; talált C: 60,8; %; H: 7,6%; O: 24,5%) további tisztítás nélkül újra oldjuk 200 ml etilacetátban és palládiumos csontszén jelenlétében a COa reakció megszűntéig hidrogénezzük. A kromatográfiásan egységes (R/1 : 0,7 ninhidrin) H-Gly-Glu(OBu<) 2 dipeptid észtert 10%-os citromsavval kirázzuk, majd a vizes oldat pH-ját 9-re állítjuk. A kivált olajat etilacetátba rázzuk át, majd szárítás után 11,1 g Z-Ala—ONSu 150 ml etilacetátos oldatát adjuk hozzá. 0°-on 24 órai szobahőmérsékleten való állás után az etilacetátos oldatot a szokásos módon kirázzuk, majd szárítás után az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A visszamaradó' szilárd habot éter-PÉ elegyével megszilárdítjuk és szűrjük. A nyers védett tripeptidészter súlya 13,2 g [53,7% kiindulási H-Glu(OBu')2-re számítva]. Etilacetát-petroléterből kristályosítva tűk, súly: 11,8 g. Op. 63—63°. 10 15 20 25 35 C26 H 39 0 8 N 3 (521,59). Elm.: C: 59,9%; H 7,5%; N: 8,0% 40 Talált: 59,6 7,7 7,8 2. lépés Z-Asp(OBuí )-Ala-Gly-Glu(OBu') 2 45 50 60 4,8 g Z-Ala-Gly-Glu(OBu02 -t oldunk 60 ml 80%-os ecetsavban és palládiumos csontszén jelenlétében a COa reakció megszűntéig hidrogénezzük. A katalizátor és oldószer eltávolítása után visszamaradó olajat (R/1 : 0,5 egységes) konyhasót tartalmazó vízben oldjuk pH: 8-ra állítjuk és a kivált olajat etilacetátba rázzuk át. Szárítás után ehhez oldathoz 3,2 g Z-Asp(OBu')—ONSu-t adunk 0°-on és a reakcióelegyet egy éjjelen át állni hagyjuk. Az oldat szokásos módon történő kirázása és szárítása után az oldószert ledesztilláljuk és a maradékot petroléter alatt megszárítjuk. A nyers védett tetrapeptidészter súlya 4,75 g (74,6% kiindulási védett tripeptidre számolva). Atkristályosítható etilacetát petroléter elegyéből. Op.: 88—90°. C34 H5 2 O u N 4 (692,78). Elm: C: 58,9%; H: 7,5%; N: 8,1%; O: 25,4% 65 Talált: 58,2 7,2 8,2 25,6 14
