155880. lajstromszámú szabadalom • Eljárás biológiailag aktív polipeptidek és intermedierek szintézisére
21 155880 22 9. példa: 1. lépés Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg(N02 )-Arg(N0 2 )-Pro-Val-Lys(BOC)—NH, a) 0,5 g védett pentapeptid-p-nitrofenüésztert (7. példa 3. lépés a) pont) reagáltatunk 0,17 g H-Val-Lys(BOC)— NH, dipeptidamiddal [K. Sturm, R. Geiger és W. Siedel: Ber. ,97, 1197 (1964)] 1,0 ml dimetilformamidban. Két nap után a reakcióelegyet éterrel hígítjuk, a csapadékot szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etilacetát-piridin-ecetsav-víz (60:10: :3:5,5) eleggyel. 0,52 g (89%) védett heptapeptidamidot nyerünk. b) 877 mg védett peBtapeptid-pentaklórfenilésztert (7. példa 3. lépés b) pont) feloldunk 1,5 ml dimetUformamidiban és 478 mg dipeptidamidot adva hozzá két napon át állni hagyjuk szobahőmérsékleten. A reakcióterméket éterrel kicsapjuk és szilikagélen tisztítjuk. 713 mg (77%) védett heptapeptidamidot kapunk. Rf2 0,61— 0,72. Rfi 0,35—0,40. 2. lépés H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)—NH2 -3 HCl 0,4 g védett heptapeptidamidot 25 ml jégecetben hidrogenolizálunk csontszenes palládium jelenlétében. A reakció végén a katalizátort kiszűrjük, az oldatot hepároljuk és a maradékot feloldjuk kloroformban. A kloroform-oldathoz 0,3 g piridin-klórhidrátot adunk, kicsapjuk éterrel és feloldjuk 0,5 ml kloroform-metanol (60:26) elegyben, majd szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk kloroform-metanol-víz (60:26: :5) eleggyel. A főterméket tisztán tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, bepároljuk és éterrel eldörzsöljük, 0,35 g (89%) heptapeptid-triklórhidrátot kapunk. iRfi 0,07—0,10. Rf 0,45—0,50 (kloroform-metanol-víz (60:26:5) rendszerben. 3. lépés BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OBuO-His-Phe-<Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Arg-Arg-Pro-Val-Lys(BOC)—NH2 197 mg védett tetradekapeptid-klórhidrátot (1. példa 10. lépés), 152 mg heptapeptidamid-triklórhidrátot, 52 mg pentaklórfenolt és 44 mg diciklohexilkarbodiimidet feloldunk 0,5 ml dimetilformamidban, mely 11 mg trietilamint is tartalmaz és két napon át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegyet peroxidmentes éterrel hígítjuk, a csapadékot 10 g szilikagélből készített oszlopon kromatografáljuk etilacetát-piridin-hangyasav-víz (40:20:6:5,5) rendszerben. A feldolgozás végén 200 mg (61%) védett heneikozapeptidamidot kapunk. Rf5 0.35—0,40. 4. lépés 5 H-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys-Pro-Val-Gly-Lys-Lys-Arg-Arg-Pro-Val-Lys—NH2 J(J 100 mg védett heneikozapeptid védőcsoportjait az 1. példa 11. lépésben leírt módon eltávolítva 75 mg (80%) heneikozapeptidamidot kapunk. Rfe 0,20—-0,25. 15 10. példa: 1. lépés Z-Gly-Ala-Glu(OBu') — OBu' 20 150 ml vízmentes dioxánban feloldunk 58,1 g Z-Ala—ONSu aktív észtert (ahol NSu a szukcinimid gyökét jelenti) és 200 ml vízmentes dioxáriban oldott 54;4 g Glu(OBu')-OBu' észterhez öntjük. A reakcióelegyet 1 órát szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd 1 liter etilacetátot adunk hozzá és vízzel kirázzuk. Szárítás után a csontszenes palládium jelenlétében hidrogenizáljuk, majd a szabad dipeptidésztert 30 10%-os citromsavoldatba rázzuk át. A vizes oldatot nátrium-karbonáttal meglúgosítjuk (pH 9) és az olaj formájában elkülönülő dipeptidésztert éterrel kirázzuk. Az éter ledesztillálása után visszamaradó Ala-Glu(OBuf )-OBu' dipep-25 tidésztert 1 liter etilacetátban oldjuk és 45,8 g Z-Gly-ONSu aktív észtert adunk hozzá. A reakcióelegyet másnapig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd IN sósavval, 8%.-os nátrium-hidrokarbonát oldattal, vízzel kirázzuk és szárítás 40 után az etilacetátot ledesztilláljuk. Az olajos maradék petroléter alatt állva megszilárdul. 2i50 ml diizopropiléterből átkristályosítva 65— 68,5 g (83—^85%) védett ,tripeptidésztert kapunk. Op.: 105—107 C°. [a] —32,5 35,7° (c = 45 =1, metanol). 2. lépés 50 Z-Asp(OBu')—ONSu 58,6 g finoman elporított Z-Asp(OBu0— OH diciklohexilaminsót rázótölcsérben 2;50 ml éterben szuszpendálunk és 3,3 ml tömény kénsav 55 és 200 ml víz elegyével oldódásig rázzuk. A vizes részt éterrel, vagy az egyesített éteres oldatot vízzel mossuk, majd szárítás után az étert ledesztilláljuk. A visszamaradó olajat 250 ml vízmentes dioxánban oldjuk, és jegesvizes 60 hűtés mellett 13,4 g N-hidroxiszukcinimidet és 22,4 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Másnapig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd a diciklohexilkarbomid kiszűrése után a dioxános oldatot vákuumban bepároljuk és a 65 kapott olajat petroléter alatt megszárítjuk. 100 11
