155813. lajstromszámú szabadalom • Eljárás heptafungin előállítására mikrobiológiai úton
155813 énekkel (Ed. Barowski és munkatársai, Antimicrobial Agent Annual, I960, 538 old.). 200 csöves automata Tettamanti-Uskert rendszerű készülékkel dolgoztunk. Az alkamazott oldószer kloroform, metanol és 8,35 pH-jú borát puffer 2:2:1 arányú elegye volt. Egy kísérlethez 1 gramm antibiotikumot használtunk, a megosztási idő 4,5 perc volt. A következő aromás heptaén antibiotikumokat vizsgáltuk: trichomicin, kandicidin, hamicin és heptafungin. A heptafungin ellenáramú megosztással 3 komponensre vált szét, az aktivitás mintegy 85%^áért azonban egy komponens volt felelős. Ez a főkomponens a 80-as csőnél adott maximumot, a két kisebb maximum helye a 35-ös, illetve a 150-es csőnél volt. E csúcsokhoz az aktivitás 7,5—7,5%-a tartozott. Párhuzamos kísérleteinkben a kandicidin és a hamicin, valamint a trichoimicin csúcsfrakciója azonos helyen, a 110-es. csőnél volt, a trichomicin B komponense pedig a 150-es csőnél [Kalász és munkatársai, Acta Cihm. Acad. Sei. Hung., Tom. 51, 431 (1967)]. A heptafungin főkomponense tehát különbözik a gyógyászati forgalomban levő heptaén antibiotikumok mikrobiológiai aktivitásáért felelős komponenstől, egyik alkomponense megegyezik a trichomicin B-vel, másik alkomponense pedig a főkomponenshez hasonlóan új, eddig ismeretlen heptaén komponens. Az új antibiotikum termelését és elkülönítését az alábbi példákkal szemléltetjük: 1. példa: A Streptomyces achromolavendulae spóraszuszpenziójával (a spóra termelése burgonyafcivonat-glukóz-agaron történt a szokásos módon) beoltottunk 10 db 50'0 ml-es Erlenmeyerlombifcban levő alábbi összetételű táptalajt (100 ml): Glukóz Amerikai mogyoróliszt Kazein hidrolizátum 3 % 1 % 0,2% (kazeinre számítva) Kukoricalekvár 0,2% CaC03 0,5% NaCl 0,3% pH 6,8—7,0 (sterilezés előtt). Az inokulum-tenyészetet 48 órán át rázattuk 28 C°-on sík-rázógépen, majd 100 liter hasznos térfogatú üzemi fermentort oltottunk vele, melynek táptalaj-összetétele a következő: Glukóz 3 % Amerikai mogyoróliszt 2 % Kukoricáiéi ivar 0,5% Trijpszinnel emésztett kazein 0,5%. (kazeinre számítva) CaC03 0,5% NaCl 0,3% Belefőzve 0,15% tributilfoszfát habgátló, adagolásra a szokásos módon előkészítve ugyanennyi. pH 6,8—7,0 sterilezés előtt. A táptalaj steri-5 lezése 30 percen át 121 C°-o,n történt. A fenti inofculummal való oltás után a tenyésztést 28 C°-on végeztük a szokásos módon, keverés közben. A fermentort 100 liter/perc sebességgel levegőztettük. A fermentlé a telU nyésztés 74. órájában 320 //.g/ml antibiotiku- ( mot tartalmazott (a meghatározás a heptaénekre jellemző ultraibolya fény-abszorpció segítségével történt). 15 2. példa: A Streptomyces achromolavendulae spóraszuszpenziójával beoltottunk 100 liter hasznos térfogatú üzemi fermentort, és az 1. példában 2Q megadott módon 48 órán át tenyésztettük, majd tovább oltottuk 100 liter hasznos térfogatú fermentorba, amelynek, táptalaj-összetétele a következő volt: 25 40 Amerikai i mogyoróliszt 2 % Kukorica lekvár 1 % Tripszinnel emésztett kazein 0,5% (kazeinre számítva) Glukóz 5,0% CaC03 0,5% NaCl 0,3% 30 Belefőzve 0,15% TBP habgátló, pH sterilizes 35 előtt 7,0. A szokásos módon végzett fermentáció a 75. órában 435 /xg/ml antibiotikum-termelési szintet ért el. példa: 50 liter erjesztéses oldatból (melynek aktivitása 0,4 g/liter, és pH-ját oxálsav oldattal 4,0-ra állítottuk) leszűrt 4 kg nedves mieéliumot 45 2,5-szeres térfogatú (10 liter) acetonnal extraháltunk a pH 7,5-re való állítása után. A szuszpenziót leszűrve a mieéliumot még egyszer extraháltuk (6 liter 75—! 80%-os acetonnal) 7,5-ös pH-^n, majd szűrtük. 50 Az egyesített extraiktumokat vákuumban 2:0— 40 C°-on .acetonmentesítettük. A vizes maradékbői az antibiotikum kivált, amit a pH 4,5-re való állításával tettünk teljessé. Az antibiotikumot szűréssel elkülönítettük, 250 ml 4,5 55 pH-jú vízben szuszpendáltuk, szűrtük és vákuumban szárítottuk. A termék súlya 10,9 g, aktivitása a standard 85—95%-a, El°'°m = 380 m^-nál 450—550. Kitermelés 49%. 60 4. példa: 50 liter erjesztéses oldat szűrésekor a 3. példa szerint jártunk el. A kb. 4 kg súlyú nedves 65 miciléumot 2,5-szeres térfogatú (10 liter) n-bu-3
