155683. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 9 béta,10 alfa-szteroidok előállítására
155683 11 12 1,2 g dezA-pregn-9-én-5,20-dionnak 20 ml metanollal készített 0 C°-os oldatához lassan 1,2 g nátriumbórhidrid 22 ml metanollal készített lehűtött oldatát adjuk, majd a kapott elegyet 0 C°-on 72 órán keresztül állni hagyjuk. Ezután 100 ml vízzel hígítjuk és 4 alkalommal 100— 100 ml kloroformmal extraháljuk. Az extraktumokat vizes nátriumszulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. Így színtelen olajos terméket kapunk, amelyet 250 ml kloroformban feloldunk és 6 g mangándioxidot adunk hozzá, majd 72 órán át szobahőmérsékleten keverjük, szűrjük és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot szilikagél oszlopon kromatografáljuk és 5% etilacetátot tartalmazó benzollal eluáljuk, így a töményítés után kristályos 20ß-hidroxi-dezA-pregn-9-én-5-ont kapunk. Metilénklorid-petroléter elegyből történő átkristályosítás után a nyert színtelen tűk olvadáspontja 122— 123 C°; (a)g—33° (c = 0,5, abszolút etanolban). 262 mg 5%-os ródium-alumíniumoxid katalizátor 26 ml 95%-os etanol és 5,25 ml 2n vizes nátriumhidroxid elegyével képezett szuszpenzióját szobahőmérsékleten, atmoszferikus nyomáson hidrogénezzük. Az elegyhez 262 mg 20ß-hidroxi-dezA-pregn-9-én-5-onnak 15 ml 95 százalékos etanolos oldatát adagoljuk és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten, atmoszferikus nyomáson hidrogénezzük. 1 mól ekvivalens hidrogén abszorbeálódása után a reakciót leállítjuk és a katalizátort szűréssel eltávolítjuk. A szűrletet éjszakán át állni hagyjuk, majd vákuumban töményítjük. A maradékhoz 1 ml jégecetet adunk és 1 liter éterben feloldjuk. A zavaros oldatot 2n vizes nátriumkarbonáttal, majd vízzel mossuk. Ezután vízmentes nátriumszulfáttal szárítjuk és vákuumban szárazra pároljuk. Színtelen olajat kapunk, melyet szilikagél oszlopon kromatografálunk és 1% etilacetátot tartalmazó benzollal eluálunk. Az eluálás során először a 20ß-hidroxi~ -10a-dezA-pregnán-5-on-frakciót kapjuk, melynek olvadáspontja metilklorid-petroléter elegyből történő átkristályosítás után 107— 108 C°; R. D. (metanolban) (a)soo—25,3°, (a)m —89°, (a)3öo—274°, (0)305—1335°, (a)3oo—1165°. A további eluálással a 20ß-hidroxi-9ß,10ß-dezA-pregnán-5-ont kapjuk színtelen olaj formájában. R. D. (metanolban): («)5oo—14,8°, (0)400—4,4°, (0)350 + 22,2°, (0)310 + 2148°. 3. példa 17a-acetoxi-20ß-hidroxi-9ß, 10ß-dezA-pregnan-5,20-diont metilvinilketonnal az 1. példa szerint kondenzálunk, azzal a változtatással, hogy reakcióközegként abszolút etanol helyett jégecetet és katalizátorként nátriumetilát helyett p-toluolszulfonsavat alkalmazunk. A kapott termék a 17a-acetoxi-20ß-hidroxi-9ß, 10oc-pregn-4-én-3-on. A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 12 liter 4,3—4,5 pH értékre beállított sterilezett táptalajt — mely 1 liter csapvízben 20 g Edamint (enzimes laktalbumin hidrolizátum), 3 g kukoricalekvárt és 50 g technikai dextrózt tartalmaz — Rizopus nigricans mínusz-mutánssal (ATCC 6227b) beoltunk, majd levegőztetés és keverés közben 24 órán át 28 C°-on inkubálunk, miközben a levegőztetés mértékét úgy állítjuk be, hogy 5 az oxigénfelvétel Cooper és munkatársainak módszere szerint [Ind. Eng. Chem. 36, 504 <1944)] 6,3—7 millimól/óra/liter nátriumszulfit legyen. A 24 órás tenyészetet 150 ml acetonban 6 g,17a-acetoxi-progeszteronnal elegyítjük, majd a ka-10 pott szteroid-szuszpenziót további 24 órán keresztül a fenti hőmérsékleti és levegőztetési viszonyok mellett inkubáljuk. A micéliumot ezután elválasztjuk és térfogatával kb. azonos mennyiségű acetonnal és metilénkloriddal két-15 szer-kétszer extraháljuk. Az extraktokat a szubsztrátummal egyesítjük, majd metilénkloriddal kétszer (az egyes extrakciós lépéseknél felhasznált oldószer mennyisége az egyesített extraktor és a fermentlé térfogatának a fele), 20 majd ismét metilénkloriddal kétszer extraháljuk (a metilénklorid mennyisége az egyes extrakciós lépéseknél az egyesített extraktok és a fermentlé térfogatának negyedrésze). Az egyesített metilénkloridos extraktokat ezután térfogatuk 10%-25 ának megfelelő mennyiségű 2%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal két részletben mossuk, majd 3—5 g nátriumszulfáttal/liter szárítjuk és szűrjük. Az oldószert ledesztilláljuk, a maradékot minimális mennyiségű metüénklorid-30 ban oldjuk, az oldatot szűrjük és az oldószert lehajtjuk. A visszamaradó kristályokat szárítjuk és 5 X 5 ml éterrel/l g anyag mossuk. Az ily módon kapott 17a-acetoxi-lla-hidroxi-progeszteront éterből átkristályosítjuk. A termék metánszulfo-35 nilkloriddal történő kezelése útján 17u-acetoxi-1 la-meziloxi-prpgeszteront kapunk. A 17 -acetoxi-lla-meziloxi-progeszteron ozonizálása útján 17 -acetoxi-5,20-dioxo-lla-meziloxi-A-nor-3,5-szeko-pregnán-3-karbonsavat kapunk, 40 melyet előbb nátriumsóvá alakítunk, majd 17a-acetoxi-dezA-pregn-9-én-5,20-dionná pirolizúlunk. Redukció és reoxidáció után 17a-acetoxi-20ß-hidroxi-dezA-pregn-9-en-5,20-diont kapunk, melyből savas körülmények között ródium kata-45 lizátor jelenlétében végrehajtott hidrogénezéssel 17a-acetoxi-20ß-hidroxi-9ß,10ß-dezA-pregnan-5,20-diont kapunk. 50 55 4. példa 20ß-hidroxi-9ß,10ß-dezA-pregnan-5-ont és ,etilvinilketont az 1. példában megadott módon kondenzálunk. A kapott termék a 20ß-hidroxi-4-metil-9ß,10a-pregn-4-en-3-on. 5. példa 17a-(prop-l'linil)-17ß-hidroxi-9ß,10ß-dezA-androsztán-5-ont és metilvinilketont az 1. példa szerint kondenzálunk. A kapott termék a 17a-(prop-1 '-inil)-l 7ß-hidroxi-9 ß, 10a-androsz tán-4-60 -én-3-on. Olvadáspontja 164—165 C°. A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: Tesztoszteron ozonizálásával 17ß-hidroxi-5--oxo-3,5-szeko-A-nor-androsztán-3-karbonsavat 65 készítünk. 6
