155643. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hipoallergén penicillin-származékok előállítására

3 Az antigén anyagok elsősorban nagymolekulasúlyú fehérjeszerű vagy poliszacharid-jellegű anyagokból állnak, amelyekhez kovalens kötéssel kapcsolódnak hapten jellegű penicilloil-csoportok. Ha a penicillint közvetlenül a fermentációs közegből nyerjük ki, akkor a penicillinnek a fermentációs művelet során jelenlevő fehérje jellegű anyagokkal való reakciójából származó penicilloil-csoportok vannak jelen. Ha a penicillint 6-amino-penicülánsav acilezése útján állítjuk elő, akkor a penicilloil-hapténcsoportokat tartalmazó fehérjeanyag a 6-amino-penicillánsavhoz kapcsolódik és az ennek előállítására szolgáló mikrobiológiai műveletek során kerül a rendszerbe. Egyes esetekben az antigén-anyag, amely akár bizonyos penicillinekbe, akár a 6-amino-penicillánsavban jelen lehet, magából a penicillin molekulából keletkezik valamilyen polimerizációs folyamat útján. A találmány szerinti eljárás különösen a szokásos prekurzoros eljárással előállított benzilpenicillin és fenoximetilpenicillin, valamint nem toxikus sóik esetében, valamint a kereskedelemben beszerezhető félszintetikus penicillinek esetében alkalmazható előnyösen; ez utóbbiak a 6-aminopenicülánsavból kerülnek előállításra és elsősorban a következők lehetnek: phenethicillin = alfa-fenoxietilpenicillin propicillin = alfa-fenoxipropilpenicillin ampicülin — alfa-aminobenzilpenicillin cloxacillin = 3-o-klórfenil-5-metil-4-izoxazolilpenicülin dicloxacillin = 3-(2',6'-diklórfenil)-5-metil-4-izoxazolilpenicillin methicillin = 2,6-dimetoxifenilpenicülin, valamint ezek nem toxikus sói. A nem toxikus sók sorába a nem toxikus fémsók, mint a nátrium-, kálium-, kalcium- és alumíniumsók, valamint az ammónium- és helyettesített ammóniumsók, pl. a nem toxikus aminokkal, pl. trialkilaminokkal képezett sók tartoznak; ilyen aminők pl. a trietilamin, prokain, dibenzilamin, N-benzil-béta-fenetilamin, 1-efenamin, N.N-dibenzil-etiléndiamin, dehidro-abietilamin, N,N'-bisz-dehidroabietil-etiléndiamin, valamint más, benzilpenicillin-sók képzésére használatos aminők. A találmány szerinti eljárás egyik előnyös kiviteli módja esetében a penicillineket vetjük alá tisztítási műveletnek, ill. műveleteknek. Eljárhatunk azonban olymódon is, hogy a penicillin előállítására felhasználásra kerülő 6-amino-penicillánsavat tisztítjuk a kereskedelmi minőségű (közvetlen fermentálással vagy fermentációs eredetű penicillinek enzimes hasításával előállított) penicillinsavban jelenlevő nagy molekulájú szenynyezések eltávolítása céljából. Az említett fermentációs és hasítási eljárások során a nagymolekulájú szennyezések a fermentációs közegben vannak jelen és így az allergen hatású anyagok 4 akár innen, akár pedig a hasításhoz alkalmazott enzimkészítményekből is származhatnak. A penicillinnek vagy a penicillin előállítására 5 felhasználandó 6-amino-penicillánsavnak a tisztítása oly eljárásokkal történik, amelyek a molekulasúly-különbségek kihasználásán alapulnak, mégpedig dialízissel vagy molekuláris szűrők alkalmazásával. 10 Különösen előnyös az oly molekuláris szűrőanyagok alkalmazása, amelyek a cukor erjesztése útján nyerhető dextrán oly módosított származékai, amelyekben a dextrán lineáris makro-15 molekulái hídkötések útján egymáshoz kapcsolódnak és így a poliszacharid-láncok háromdimenziós térhálós szerkezete alakul ki. Egy kereskedelmi forgalomban beszerezhető és e célra jól alkalmazható ilyen termék „Sephadex" néven is-20 méretes. Az antigén anyagoknak a kezelt penicillinből való eltávolítása az ún. passzív kután anafilaxiás próba (P.C.A. teszt) útján mutatható ki; ennek 25 kivitelezése az alábbi módon történhet: Anti-penicilloil antitesteket állítunk elő olymódon, hogy egy nyúlnak szubkután és intradermális úton egy erre alkalmas penicillin-protein konjugátumot adunk be Freund-féle komplett 30 adjuvánssal együtt. Megfelelő idő elteltével a nyulat véreztetjük és a szérumot felfogjuk. E szérum hígításait azután intradermális injekcióban egy tengerimalac bőrébe fecskendezzük. 18—24 óra múlva a tengerimalacnak intravénás injek-35 cióban beadjuk a penicillin-specifikus antigénre vizsgálandó penicillint, 0,3 ml 5%-os „pontamine sky blue" oldattal együtt. Penicillin-specifikus antigén jelenléte esetén ez reagálni fog a tengerimalac bőrében a rögzített idiospecifikus antitest-40 tel és e reakció a bőr kapilláris permeabilitásának megnövekedésével jár, aminek következtében a kék színezék megjelenik a bőrfelületen. A reakció foka a fellépő kék foltok átmérője, valamint az éppen még látható reakciót adó legki-45 sebb antitest-koncentráció alapján mérhető. Az antigén mennyiségének mérése céljából előzetes elválasztást kell végezni, minthogy maga a penicillin is gátolja a reakciónak az állaton való 50 fellépését. Ezt az elválasztást olymódon végezzük, hogy a penicillin minta 2 g mennyiségét 5 ml vízben oldjuk és az oldatot egy finomszemcséjű „Sephadex G25" molekuláris szűrőanyaggal töltött „LKB recychrom" oszlopon visszük keresztül. Az 55 antigén anyag a penicillin előtt vándorol; a megfelelő frakciókat összegyűjtjük és az így kapott anyagot használjuk fel a szenzitizált tengerimalacnak beadandó injekcióhoz. A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli 60 módjait az alábbi példák szemléltetik közelebbről. 1. példa 500 g G-penicülint (benzilpenicillin, az angol 65 gyógyszerkönyv szerinti minőség) aszeptikus kö-2