155623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tejalvasztó enzim előállítására
155623 dia) intézet azonosította a Mucor miehei (Cooney et Emerson) csoport egy törzseként. Az új törzset ennél az intézetnél helyeztük letétbe az említett CBS 370.65 nyilvántartási szám alatt. Az alábbiakban adjuk meg az új Mucor CBS 370.65 törzs morfológiai leírását: Légmicélium: rövid, 2—3 mm magas, előbb fehér, majd később egérszürke vagy sötét egérszürke ; sporangiophorák: 6—10 mikron átmérőjűek, szinpodiálisan elágazóak; sporangiumok: gömbölyűek, 25—60 mikron átmérővel, falaikon rövid tüskékkel; kolumellák: gömbölyded vagy ovális alakúak, 20—40 mikron átmérővel; sporangiosporák: színtelenek, gömbölyded vagy eliptikus alakúak, 3—5 X 4—6 mikron méretűek; zygosporák: nagyszámú, gömbölyded; szemölcsösek, fiatal korban sárgástól vörösesbarnáig terjedő színűek, érett állapotban feketések, 30—45 mikron átmérővel; homothallikus micéliumon képződnek; azygosporák: vannak; gemmák: ismeretlen; fejlődés: 30—55 C° hőmérsékleten fejlődik, 40 C°-on igen gyors a fejlődés. A tejalvasztó enzimnek a fent említett Mucor CBS 370.65 törzs alámerülő kultúrában, megfelelő táptalajon történő tenyésztése útján való termelését közelebbről az alábbi példák szemléltetik: I. Rázópalackos kísérlet Az alábbi összetételű táptalajt alkalmaztuk: burgonyakeményítő 40 g/liter szójaliszt 30 g/liter darált árpa 100 g/liter kalciumkarbonát 5 g/liter szójaolaj 0,5 ml/liter Három 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba 100— 100 ml fenti tápközeget vittünk be és beoltottuk a Mucor miehei (Cooney et Emerson) CBS 370.65 törzs spóraszuszpenziójával, majd a lombikokat rázóasztalon 7 napig rázattuk 30 C° hőmérsékleten. A micéliumot azután kiszűrtük és a szüredék enzimaktivitását Kunitz módszere (J. Gen. Physiol. 28, 450, 1935) szerint meghatároztuk. Az alábbi eredményeket kaptuk: I. lombik: 15 800 Kunitz-oltóegység/liter II. lombik: 17 700 Kunitz-oltóegység/liter III. lombik: 15 700 Kunitz-oltóegység/liter 2. Kísérleti üzemi méretű kísérlet Egy inokulálótartányban az alábbi összetételű tápközeget készítettük el.:. burgonyakeményítő 2 kg szójaliszt 1,5 kg árpaliszt 5 kg baktérium-amiláz (Novo 5000 SKB) 5 g kalciumkarbonát 500 g 10 15 20 25 30 Az elegyet kb. 70 C° hőmérsékletre hevítettük és kb. 30 percig ezen a hőfokon tartottuk. Ezután 90 percig forraltuk az elegyet 120 C° hőmérsékleten, közvetlen gőzbefúvatással; lehűlés után az elegy térfogata kb. 50 liter volt. 34 C° hőmérsékletre történt lehűlés után a közeget beoltottuk egy oly spóraszuszpenzióval, amelyet egy Fernbach-lombikban tenyésztettünk, az alábbi összetételű YPPSS-agaron (vö: Thermophillic Fungi, Cooney et Emerson, London 1964): élesztőkivonat K2 HP0 4 MgSCv7 H2 0 oldható keményítő agár víz 4 g 1 g 0,5 g 15 g 20 g 1000 ml A fenti 'f'tápközeget a Fernbach-lombikban a Mucor miehei (Cooney et Emerson) CBS 370.65 törzs liofilizált kultúrájával oltottuk be és 40 C° hőmérsékleten inkubáltattuk spóráztatás céljából. Az inokulálótartány tartalmát a beoltás után percenkint 240 fordulattal kevertük és percenkint 60 liter levegővel szellőztettük. A fermentációt 48 óra hosszat folytattuk, ennyi ideig volt a tartányban a mikroorganizmus jó fejlődése megfigyelhető. A tartány tartalmát azután átvittük egy fermentáló tartányba, amely az alábbi összetételű 35 tápközeget tartalmazta: burgonyakeményítő 8 kg szójaliszt 6 kg árpaőrlemény 20 kg 40 baktérium-amiláz (Novo 5000 SKB) 25 g kalciumkarbonát 2 kg A közeget beoltás előtt ugyanúgy forraltuk és sterilizáltuk, amint ezt az inokuláló-tartány ese-45 tében leírtuk; a tápközeg végső térfogata 200 liter volt. Beoltás után megkezdtük a tartány tartalmának keverését (percenkint 400 fordulattal) és szellőzését (percenkint 0,2 m3 levegővel), hab-50 zásgátlószerként a szükséghez képest adtunk hozzá szójaolajat. A közeg pH-értéke a fermentáció folyamán állandóan 6,5 volt. 129 óra elteltével a kultúra-közeg tejalvasztó enzimaktivitása 2580 Kunitz oltóegység/liter 55 volt. 3. További rázópalackos kísérlet 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokat alkalmaz-60 tunk, amelyek 100 ml mennyiségben tartalmazták az alábbi táblázatban megadott összetételű különféle tápközegeket. A lombikokat rotációs rázóasztalon, percenkint 240 fordulattal rázatva, 30 C° hőmérsékleten inkubáltattuk, az alábbi víz kb. 40 liter 65 táblázatban megadott ideig. 2
