155623. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tejalvasztó enzim előállítására
5 155623 6 •* CO co CO ß 0) CM a CO r—1 in "SB W N CO CO «o IM -O o -*J in CS CM "3 N •CS N T-H J3 3 'CO in H o cu i—1 •0 OS cu N co CO sO in C5 an CU N :0 _cu -*J !* < BS 0) N :0 Jd a 'ca H T-H m oo o "tfl o CM o o © o co o o o o co o in o 1< o co o o o o TF CO »H iß CO .-H to CO T-H m co 11 S J5& •3 s| es es S 3 3 . Ö a o cu > W w < « W $ « 3 N A! M SR O 0i CO £' ^ T 1 cö CO " &; Ü M Inokulumként oly spóraszuszpenziót alkalmaztunk, amelyet Mucor miehei (Cooney et Emerson) CBS 370.65 törzs YPPSS-agaron 40 C° hőmérsékleten 2—3 napig tartó tenyésztése, majd a képződött spórák steril vízzel való lemosása útján nyertünk. Az YPPSS-agar összetétele a fent megadottal egyező volt. A kultúra tejalvasztó enzim-aktivitását Kunitz módszerével határoztuk meg; a táblázatban megadott értékek KRU-egységekben (Kunitz-oltóegységek) vannak megadva. A táblázat a tápközegek összetételét g/liter egységekben adja meg. Valamennyi megadott táptalajban a keményítőt sterilizálás előtt baktérium-amiláz enzimkészítménnyel lebontottuk. A fent leírt rázópalackos kísérletek során kapott tejalvasztó enzim-hozamhoz hasonlóak érhetők el kísérleti üzemi méretben is. 4. összehasonlító kísérlet Mucor pusillus törzszsel A találmány további szemléltetése céljából a fent leírthoz hasonló módon tejalvasztó enzimet állítottunk elő Mucor pusillus mikroorganizmussal is, amelyet a Centraalbureai voor Schimmélculturen (Baarn, Hollandia) intézettől szereztünk be. Rázópalacban, a fenti táblázatban megadott összetételű 95. tápközegben kb. 300 Kunitzoltóegység/liter hozamot kaptunk, míg a Mucor miehei CBS 370.65 törzzsel ugyanilyen körülmények között kb. 10 000 Kunitz-oltóegység/ liter vagy még ennél is jóval nagyobb tejalvasztó enzim-termelést értünk el. 10% lefölözött tejet, 1% glükózt, 0,1% élesztőkivonatot és 0,005 mól kalciumkloridot tartalma-Ol o •& e» CO CO •* i-l m i-t m CO CO l-l CO t> IM •* IM c~ •* CO CO .<£ CO a 1—1 1-t -CB H-s 3 co M Ci 1-t o 1> CO cí co" IN CO co" eo" -cd i-t i-t ^ £5 o (M CO CM 'CO cn 3 CM" co" •*" co" co" co" C TH i-t 1-t C >3 ce CO CM o c-^ CO •i—j co" C-" CO Cp" co" co" CL) i-t 1-t 1-t 3 •*» CO N CM 1—1 in a> o CO oí ,—1 CO CO co" T3 r-i TH CM in e» CO o CO in a i—1 i-T CO cco" C-" a i-i i-t 1-t CB X a cc-CO 1-t 1-t ^t X a e» o" <*" co" C-" i> X a 1-t T-I CU > CU > in •* CM r-1^ e» o cu co" in C-" co" CD" C" i-t i-t i-t ,rt Stf a 0, a a a a -*•* CS CS CS CS CB CS > a a Ö c a c •j3 CO c-CO CO t-CO a < 1 co -CB -ÍJ s s C > tó ^i 'Ol 1 X « a tó a 10 15 20 25 30 zó tápközeggel az alábbi eredményeket értük el: Mucor pusillus: 900 Kunitz-oltóegység/liter Mucor miehei 35 CBS 370.65: 5500 Kunitz-oltóegység/liter 5. Kísérlet felületi kultúrával 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban 25—25 g oly tápközeget sterilizáltunk, amely búzakorpa 40 és víz 1:1 elegyéből állt. A palackokat sterilizálás céljából 45 percig hevítettük 120 C° hőmérsékleten, majd 40 C°-ra történő lehűlés után beoltottuk őket a Mucor miehei (Cooney et Emerson) CBS 370.65 törzs fenti módon nyert 45 spóraszuszpenziójával. A lombikokat azután 3 napig inkubáltattuk 40 C° hőmérsékleten. A korpát 200 ml vízzel extraháltuk; a kapott kivonat tejalvasztó enzim-aktivitása 4500 Kunitzoltóegység/liter volt. 50 A találmány szerinti eljárással előállított tejalvasztó enzim tulajdonságait összehasonlítottuk a borjúgyomorból nyert oltó tulajdonságaival is; az alábbi eredményeket kaptuk: Nátrium-kazeináttal szembeni aktivitás össze-55 hasonlítása az oltóéval, 6,3 pH-értéken, 37 C° hőmérsékleten : A kétféle enzimet ugyanolyan Kunitz-oltóegységnek megfelelő mennyiségben alkalmaztuk; 60 triklórecetsavval történő lecsapás után 280 millimikronnál határoztuk meg az optikai sűrűséget. 180 perc elteltével az oltóval kezelt kazeinát optikai sűrűsége nem változott (állandóan 0,137 volt), míg a Mucor miehei törzzsel előállított en-65 zimmel kezelt kazeinát optikai sűrűsége 0,136-3
