155527. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Streptomyees és Penicillium-fajok mutagén kezelésére és fermentálására
155527 technológiai szempontból hátrányokat nem észleltünk. A találmányunk szerinti eljárással a rendszeres törzsfenntartó munka hatásfoka kisebb munkaerő ráfordítással is lényegesen jobb volt, mint a találmányunk alkalmazásbavétele előtt. Találmányunk részleteit a példákban ismertetjük. 1. példa: Penicillium chrysogenum vizes spóraszuszpenzióhoz frissen oldott, sterilre szűrt MBA és NaHCC-3 oldatot mértünk oly mennyiségben, hogy a végtérfogatban: 10 000 db db/ml spóra 0,01 mól MBA 0,04 mól NaHC03 koncentráció viszonyok alakultak ki. Az így összemért anyagot 70 percig 25 C°-os thermosztátba helyeztük, és gondoskodtunk állandó kevertetéséről. 70 perc eltelte után az MBA biológiai hatását urotropin adagolásával állítottuk le olymódon, hogy az MBA : urotropin mól arány 1 : 3 volt. Az így nyert elegyből 2—2 ml-t 5X210 cm2 felületű, Blék üvegben elkészített szilárd táptalajra szélesztettünk. A szélesztményekből táptalajonként kifejlődött telepek száma átlagából kiszámítottuk, hogy a letalitás 98,85%-os volt. Az elegy további részletéhez steril táptalaj sűrítményt kevertünk oly mennyiségben, hogy a végtérfogatban nyitott termelőképesség szerint a következőképpen voltak osztályozhatók. 5000 db/ml spóra 0,005 mól MBA 0,02 mól NaHCOa 1% glükóz 0,25% Corn steep liquor 0,4% (NH4 ) 2 S0 4 koncentráció viszonyok alakultak ki. Az elegy pH-ját 6,0-ra állítottuk be. Az így nyert elegyet 50 ml-enként 500-as Erlenmayerben steril körülmények között 25 C°-on. 6 órán át rázattuk olyan rázóasztalon, melynek fordulatszáma 290 r/min., kitérése 46 0 mm volt. Ezután az elegyet 3 mm rétegvastagságban, 10 percen át UV besugárzásnak vetettük alá. (UV lámpa adatai: Labor gyártmány 300 W.) A besugárzás után kapott elegyből 2—2 ml-t 20X210 cm2 felületű, Blék üvegben elkészített szilárd táptalajra szélesztettünk. A szélesztményekből táptalajonként kifejlődött telepek száma átlagából kiszámítottuk, hogy a letalitás az utókezelésnél (az első kezelést túlélő spórák számához viszonyítottan) 93,1%-os volt. Az így nyert telepekből a 152 430 számú magyar szabadalom szerinti eljárással készített üzemi oltóanyagokat süllyesztett rázott kultúrában minőségi vizsgálatnak vetettük alá, és azt találtuk, hogy az összes levizsgált telep %-ában kifejezve a telepek utódai, a kontrollhoz viszo-Termelőképesség a Telepek arányszáma az öszkontroll %-ában szes levizsgált telep %-ában 0—20 1,2 20— 40 8,0 40— 60 2,3 60— 80 14,0 80—90 30,0 90—100 22,2 100—110 16,0 110—120 6,3 10 15 A törzs egyes mutánsainak rázott kultúrában megmutatkozott termelőképesség fokozódását, egy ezideig levizsgált mutáns esetében üzemi szinten is realizáltuk. A jól termelő mutánsból készített üzemi oltó-20 anyag-sorozat egyes tagjait 3 m3 -es keverős vasfermentorban 1 :1 arányú levegőztetés mellett, 1,8% szaharózt, 1,0% corn steep liquort, 25 0,5% kálciumkarbonátot, 0,5% pálmaolajat tartalmazó steril táptalajokon 25 C°-on 5-ös induló pH mellett 48 óra alatt inokulum fermentációvá növesztettük. 30 Az inokulum fermentációkat 30 m3 -es keverős vasfermentorokban elkészített 18 m3 4,00% laktózt, 2,00% corn steep liquort, 35 0,60% ammóniumszulfátot, 0,50% pálmaolajat, 0,27% fenoxiecetsavat tartalmazó steril táptalajokba oltottuk, és a fermentációk alatt átlagosan 1 : 0,7 arányú 3,2 szul-40 fitértéket jelentő levegőztetést biztosítottunk. A fermentációs táptalajok mennyiségéhez viszonyítottan az inokulum fermentációk térfogata 10% volt. A fermentációk induló pH-ja 5,5 volt, a pH a fermentációk során egyenletes emelkedést 45 mutatott maximum 7,2-ig. A fermentációk lefutása alatt a hőmérsékletet 25 C°-on tartottuk. A fermentációk átlagos életkora 83 óra volt. Az előállított mutáns törzzsel elért fermentációs hozam (kinyert V-penicillin mennyisége) 25 50 fermentáció átlagát alapul véve, a párhuzamosan futott 94 kontroll fermentáció átlagánál 13%kal volt magasabb. 2. példa: 55 Streptomyces G—252 természetes lelőhelyről származó, candicidint szintetizáló törzs vizes spóraszuszpenziójához frissen oldott, sterilre szűrt MBA és NaHCC>3 oldatot mértünk oly 60 mennyiségben, hogy a végtérfogatban 10 000 db/ml spóra 0,007 mól MBA 0,03 mól NaHCOs 65 koncentráció viszonyok alakultak ki.
