155365. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 16.511 R. P. antibiotikum és összetevői előállítására

155365 31 A keverék pH-ját 150 ml tömény nátronlúggal (d = 1,33) 7,5-re állítjuk be, majd gőz átbuborékoltatásával 122 C°-on 40 perc alatt sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 120 1, és a,pH-ja 6,9. Ezután beoltjuk a Streptomyces hygroscopicus var. tepidalitus DiS 21 336 törzsnek rázott Erlenmeyer-lombikban készült 200 ml tenyészetével. A fermentációt 27 C°-on keverés és steril levegővel való levegőztetés közben 29 óra hosszat folytatjuk, ennek befejeztével alkalmas a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyésztést a következő anyagokkal megtöltött 800 l-es fermentorban végezzük : kukoricalekvár 13,750 kg glukóz 16,500 kg szójaolaj 8,25 í amrnóniumszulfát 1,10 kg . kobaltklorid-hexahidrát 27,5 g vízvezetéki vízzel kiegészítve 515 l-re A keverék pH-ját 1250 ml tömény nátronlúggal (d = 1,33) 6,5-re állítjuk be, majd hozzáadunk 2,75 kg kalciumkarbonátot, majd 122 C°-os gőznek 40 percig tartó átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 550 1, és a pH-ja 6,7. Beoltjuk 55 1 oltótenyészettel a fent leírt 170 l-es fermentorból. A tenyésztést 25 C°-on 90 óra alatt végezzük percenként 205 fordulatú turbinakeverővel és óránként 25 m3

steril levegő átbuborékoltatásával. Ennek végeztével a közeg pH-ja 7,45, és a folyadék térfogata 590 1. A fermentációs lé .antibiotikum tartalma 250 E/ml. 2. példa: • Az 1. példában leírt körülmények között kapott és 300 E/ml erősségű 220 1 fermentációs levet keverővel ellátott tartályba bocsátjuk. Hozzáadunk a térfogata 70%-ának megfelelő butanolt, és a pH-ját 90 ml 5 n nátronlúgnak keverés közben való hozzáadásával 9-re állítjuk be. Félórai keverés után a keverékhez 15 kg szűrés-segítőt adunk, és a táptalajt szűrőprésen megszűrjük. A szűrőlepényt 50 1 butanollal és 50 1 vízzel mossuk. A szűredéket dekantáljuk, és a felső fázist elválasztjuk. így 205 1 butanolos antibiotikum-oMatot kapunk. Ezt az oldatot 20 torr nyomás alatt 35 C°-nál alacsonyabb hőmérsékleten 2 l-re sűrítjük be. Ezután a koncentrátumhoz 20 1 hexánt adunk, a keletkezett csapadékot elválasztjuk, mossuk, és megszárítjuk. Végül 143 g nyers antibiotikumot kapunk 300 E/mg aktivitással. 3. példa: A 2. példa szerint kapott 140 g nyers terméket 3 1 butanolból, 3 1 etilacetátból és 6 1 vízből álló elegyben szuszpendálunk. A vizes fázis pH-ját 2 ml n sósavval 7-re állítjuk be, majd az egészet 30 percig keverjük. Pihentetés után a felső fázist elválasztjuk, 6 g aktív szén-32 10 15 20 25 S0 i.5 40 45 50 55 nel kezeljük, és szűrés-segítővel szűrjük. A szűredéket 20 torr nyomás alatt 40 ml térfogatúra sűrítjük. 4 1 hexánt adunk hozzá, a keletkezett csapadékot elválasztjuk, mossuk, és megszárítjuk. így 26 g terméket kapunk 780 E/mg aktivitással. 4. példa: A 3. példában kapott 26 g terméket 20 percig keverve feloldjuk 2,5 1 etilacetátban. Ezután az oldhatatlan részt kiszűrjük és eltávolítjuk. A szűredékhez 0,9 1 vizet adunk, és a pH-ját keverés közben n sósav hozzáadásával 3-ra állítjuk be. Ezután az oldatot 1'5 percig keverjük, majd dekantáljuk. A szerves fázist csökkentett nyomás alatt 200 ml-re sűrítjük. Ezután hozzáadunk 500 ml butanolt, és 60 ml-re koncentráljuk. Az antibiotikumot 600 ml hexánnal kicsapjuk, elkülönítjük, mossuk, és megszárítjuk. így 9,5 g antibiotikumot kapunk 1600 E/mg aktivitással. 5. példa: A 4. példában leírt módon kapott és 1500 E/mg aktivitású 120,5 g antibiotikumot feloldunk 1,25 1 34 C°-os metilénkloridban. A kapott oldatot megszűrjük, és a szűredékhez 10 g aktívszenet adunk, majd szűrés-segítő hozzáadásával ismét szűrjük. A kapott oldatot 19 1 hexánnal kicsepjuk. A 16 511 R. P.-t elválasztjuk, mossuk, és megszárítjuk. Ily módon egy terméket kapunk a következő jellemző tulajdonságokkal : biológiai aktivitás: 1745 E/mg elemi összetétel: C 65,8, H 7,8, O 22,75, N 3,55% ultraibolya színképe 10 mg/l-es metanolos oldatban : = 682 232 nm-nél (I maximum) Llcm 60 65 El cm = 375 350 nm-nél :(IT maximum) 6. példa: Egy keverővel ellátott tartályba bebocsátunk az 1. példában leírt módon készült és 250 E/ml aktivitású 590 1 tenyészlevet. A tenyészlé pH-ját 2,45 1 5 n nátronlúggal beállítjuk 9,5-re. Fél órai keverés után 22,5 kg szűrés-segítőt adunk a folyadékhoz, és a szuszpenziót szűrőprésen megszűrjük. A szűrőlepényt 100 1 vízzel mossuk. A 645 1 térfogatú szűredéket 7 pH-nál térfogata 40%-ának megfelelő metilénkloriddal extraháljuk két fokozatú ellenáramú centrifugáló berendezésben. Ä 185 1 térfogatú szerves kivonatot 8 pH-ra való beállítás után 18 1 vízzel, majd 4 pH-ra való beállítás után ismét 18 1 vízzel mossuk. A mosott kivonatot 20 torr nyomás alatt 25 G°-on pillanatbepárlóban 11,5 l-re sűrítjük. A koncentrátumot 50 g aktívszénnel kezeljük, és szűrés-segítővel megszűrjük. Ezután a koncent-18