155365. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a 16.511 R. P. antibiotikum és összetevői előállítására
155365 33 34 rátumot visszavisszük a bepárlóba, ahol a desztillációt addig folytatjuk, míg a térfogata 1 l-re csökken. Ezután az antibiotikumot 10 1 hexánnal kicsapjuk. A csapadékot elválasztjuk, mossuk, és megszárítjuk. Ily módon 61 g anti- 5 biotikumot kapunk 2153 E/mg aktivitással. 7. példa: A 6. példában leírt módon előállított 5 g 10 terméket 50 ml vízben szuszpendálunk. A pH-t 5,3 ml n nátronlúg hozzáadásával 9-re állítjuk be. Az oldhatatlan maradékot szűréssel eltávolítjuk, ily módon 32 mg terméket távolítunk el. A derített oldatot lioíilizáljuk. Végső szárítás 15 után 5,15 g 16 511 R. P. antibiotikumot kapunk nátriumsó alakjában 1785 E/mg aktivitással. A termék elemi összetétele a következő: C 61,3, H 7,95, O 23,95, N 3,30, Na 3,75%. 8. példa: Az 1. példában leírtakkal azonos módon kapott 10 1 fermentációs folyadékot 50 ml 5 n nátronlúg hozzáadása után 9,5 pH-nál szűréssegítő jelenlétében megszűrjük. A szűrőlepényt 1 1 vízzel mossuk. Összesen 10 1 szűredéket kapunk 177 E/ml aktivitással. A szűredék pH-ját n sósavval 7,5-re állítjuk be, és a szűredéket átbocsátjuk egy 400 ml klorid fázisban levő Dowex 1 x 2 gyantát tartalmazó oszlopon (a gyanta magassága 28 cm, átmérője 2,4 cm). Az átbocsátás üteme 1,5 l/h. A szűredék átbocsátása után az oszlopot 1 1 vízzel mossuk, majd 20% vizet és 1% nátriumkloridot tartlamazó metanollal eluáljuk. 5 1 eluátumot összegyűjtünk, és csökkentett nyomás alatt 1 l-re sűrítünk. A maradék metanolt ledesztilláljuk 2 1 víz folyamatos 'hozzáadása közben. A kapott végső koncentrátumot 7 pH-nál 500, majd 500, majd 250 ml butanollal extraháljuk. Az 1300 ml térfogatú kivonatot csökkentett nyomás alatt 50 ml-re sűrítjük. A koncentrátumot 500 ml hexánnal kicsapva a nyers antibiotikum kiválik. A terméket elválasztjuk, mossuk, és csökkentett nyomás alatt megszárítjuk. Ily módon 1,8 g antibiotikumot kapunk 900 E/mg aktivitással. 9. példa: Az 5. példában leírt módon előállított és 1745 E/mg aktivitású 5 g 16 511 R. P. terméket feloldunk 50 ml etilacetátban. 1 kg kovasavgélt M/15 foszfát-pufferral beállítunk 4 pH-ra, majd 110 C°-on 12 óra hosszat szárítjuk. Az így kezelt kovasavgélt etilacetátban szuszpendáljuk, és 103 cm magasságig megtoltunk vele egy 5 cm átmérőjű kromatografáló oszlopot. Ebbe az oszlopba felül bébocsátjuk az említett antibiotikum oldatot. Az átfolyás sebessége 600 ml/h. Az oldat áthaladása után a kromatogrammot etilacetáttal élőhívjuk. Az eluátumot a torony elhagyásakör 20 35 40 45 50 55 60 200 ml-es adagokban külön felfogjuk. Az aktivitást vékonyréteges kromatográfiával, ultraibolya abszorpció alapján és az egymást követő frakcióknak diffúziós elemzésével vizsgáljuk. A 38—60. számú eluált frakciók tartalmazzák a 16 511 R. P. összetevőjét. Ezeket a frakciókat egyesítjük, és 20 to>rr nyomás alatt pillanatbepárlóban 25 C°-on 100 ml-re koncentráljuk. Ezután a koncentrátumhoz 1 1 hexánt adunk. A csapadékot elválasztjuk, mossuk és szárítjuk. Ily módon 1,135 g 18 051 R. P. antibiotikumot kapunk a következő jellemző tulajdonságokkal: biológiai aktivitás: 3080 E/mg elemi összetétel: C 65,7, H 8,2, O 23,75, N 3,35% ultraibolya színkép 10 mg/l-es metanolos oldatból : E-L ,0 i er 620 233 nm-nél (I maximum) Eí c 0 m = 360 350 nm-nél (II maximum) vékonyrétegű kromatográfia kovasavgél H hordozón, etilacetát oldószerrel: Rf = 0,2. 25 10. példa: A 9. példában leírt körülmények között előállított 0,7 g 18 051 R. P.-t 40 ml vízben szuszpendálunk. Az oldatot n nátronlúggal fokozato-30 san meglúgosítjuk. A teljes oldódás 1 ml nátronlúg hozzáadására következik be, és ekkor a pH 8,5. A vizes oldatot megszűrjük, majd a szűredéket lioíilizáljuk. 0,7 g 18 091 R. P. Há1>riumsöt kapunk a következő sajátságokkal: biológiai aktivitás (diffúzió alapján): 2300 E/mg elemi összetétel: C 62,1, H 7,9, O 23,2:5, N 3,3, Na 3%. 11. példa: Egy 170 literes fermentarba töltjük a következő anyagokat: pepton 120Ö g húskivonat 600 g glukóz 1200 g agar . 120 g vízvezetéki vízzel kiegészítve 110 literre, A keverék pH-ját 120 ml tömény nátronlűggal (d = ü,33) beállítjuk 6,95-re, majd a táptalajt 122 C°-os gőznek 40 percig való átbuborékoltatásával sterilizáljuk. Lehűtés után a táptalaj térfogata 120 liter és a pH-ja 6,60. Ekkor beoltjuk a Streptomyces lavendulae 22 408 törzsnek rázott Erlenmeyer-lomMkban készült 200 ml tenyészetével. A tenyészetet ezután 25 C°-on keverés és steril levegővel való levegőztetés közben 30 óra hosszat inkubáljük; ezzel kész a termelő tenyészet beoltására. A termelő tenyészetet a következő anyagokkal töltött 800 literes fermentorhan valósítjuk 65 meg: 17
