155254. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az emberi kortikotropin szintézisére
21 155254 22 maradékot 1 liter etilacetátban oldjuk és háromszor 3010 ml 2%-os nátriumhidrokarbonát-oldattal mossuk. Szárítás után az etilacetátot vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot vízmentes éterrel eldörzsöljük, szűrjük, és vákuumban fosziforpentoxid felett szárítjuk. 49,0 g (86%) aktív észtert nyerünk, O.p.: 171—173 C°. 2. lépés: Z-Val-Lys,(BOiC)-Val-Tyr(But )-Pro-Aspi(OBu t )-Ala-Gly-OH (20—27): ISO mg finoman eliporitio.it H-Asp-(OB"ü t)-Ala-Gly-OH (1. példa 11. lépés) tripeptidet 3,8 ml vízmentes chmetilformamidban szuszpendálun'k, ami még 3iS mg trietilamint is tartalmaz. Keverés közben 365 mg Z-Val-Lys(BOC)-Val-Tyri(Buí )-Pro-OSu pentapeptid aktívésztert (2. példa 1. lépés) adunk hozzá, és szobahőmérsékleten még 12. óráig folytatjuk a keverést, miköziben a tripeptid lassan oldatba megy. Az elegyet még 36 órán át állni hagyjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 3 ml etilacetát- -piridin-jégecet-víz 120:20:6:11 arányú oldószerben oldjuk és ugyanezzel az oldószerrel eluálva szilikagéllel töltött 20x2150 mm-es oszlopon kromatografáljuk. A tiszte. termieket tartalmazó frakciókat összegyűjtjük, vákuumban bepároljuk és vízzel porrá dörzsöljük. Exszikkátorban foszforpentoxid felett szárítva termelés 304 mg (70%)- Rf2 0,50—0,35. Rffi 0,55—0,60. C6 oH i) |O ífi N 9 (1194,45). 3. lépés: Z-V.al-Lys(BOC)-Tyr!(But )-Pro-Asp(OBu t )-Ala-Gly-GlufOBu^-AspíOBu^-Gln-Ser-Ala-GluíOBu^-Ala-Plhe-Pro-Leu-Glu (OBu^-Phe-OBut (20—39) 120 mg védett oktapeptidet (0,1 mmól) (2. példa 2. lépés) 2 ml vízmentes dioxánban oldunk, 23 mg (0,2 mmól) N~hidroxisziukcinimidet adunk hozzá, majd 25 mg (0,12 mmól) dicikloihexilkárbodiimidet. Az elegyet 24 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, a leváló diciklohexilikarbaniidot szűrjük és az oldatot szárazra pároljuk. A termék nem tartalmaz rétegkrornatográfiával vizsgálva 5%-nál több kiindulási oktapeptidet, az aktív észter RfB 0,85—0,95. Az így nyert aktív észtert tisztítás nélkül oldjuk 1 ml dimetilformaimidban, majd az elegyben 170 mg (0,1 mmól) dodekapeptid-hidrokloridot (1. példa 7. lépés) oldunk fel és 0,5 ml diimetilformamidban oldott 3i0 mg (0,3 mmól) trietilamint adunk hozzá. Az elegyet két napig szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot vízzel eldörzsöljük, szűrjük és exszikkátorban szárítjuk. Termelés 222 rng védett ikozapeptid, mely messzemenően oldhatatlan vegyület. A kiindulási aktív észter, vagy az annak megfelelő szabad sav, továbbá ninhidrin-pozitfiv szennyezés nem mutatható ki benne. Rétegfcramatográfiánál 90%-os ecetsavban futtatva Rf 0,75—0,85. C14 2H 2(6 0 38 N 22 (2839,03). 4. lépés: H-Val-Lys<BOC)-Val-iTyr(But )-Pro-iAsp(OBu t )-Ala-Gly-GluíOBu^-AspíOBu^-Gln-iSer-Ala-GlüíOButJI-Ala-Phe-Pro-Leu-Glu (OBu^-Phe-OBu* (20—3'9) 100 mg védett ikozapeptidet 10 ml 80%-os ecetsaviban oldunk és 70 mg 10%-os palládium csontszén katalizátor jelenlétében 3 órán át hidrogénezzük. A katalizátor szűrése után vákuumban bepárolj uk és exszikkátorban nátriumhidroxid felett, szárítjuk. Üvegszerű pikkelyes amorf anyag, súlya 90 mg. Krornatografikusan egységes, gyengén ninihidrinpozitív anyag, védett ikozapeptidet nem tartalmaz. Rf1 0,76—0.84. Rf 6 0,47—0,53. Cm H 2l oO; 1(} N 22 (2704,90). 5. lépés: Z-Lys(BOC)-Lysi(BOC)-,Arg(!N02)-Arg(N02)-Pro-Va^Lys(BOC)-Val-Tyr(But )-Pro-Asip <OBut )-Alia-Gly-Glui(O.Bu t )-lAsp(OBu t )-Gln-Ser-Ala-GluiíOBu^-JAla-Phe-Pro-Leu-Glu (OBu^-Phe-OBu* (15—3S) 90 mg ikozapeptidet (2. példa 4. lépés) 1,0 ml dimetilformamidban oldunk, mely 6 mg trietilamint is tartalmaz. Az oldathoz 45 mg védett pentapeptid-pentiaklórfenilésztert '(1. példa 17/b. lépés) adunlk és 3 napon át hagyjuk szobahőmérsékleten állni. Az oldószert vákuumban lepároljuik, s a maradékot a változatlan iközapeptidtől és kevés pentapeptid aktívésztertől szilikagélen végzett oszlopkromatográfiával tisztítjuk meg (oldószer etilacetát-piridin-jégeeet-víz 120 : 20 : 6 : 11 vagy kloroform-metanol 80 : 20). Termelés 54 mg (40%). Rf2 0,42—0,47. Rf 5 0,55—0,60 (vö. 1. példa 217. lépésével). 3. példa: Szárazampullában liofilizálással az alábbi alkatrészeikből álló készítményt állítjuk elő: 0,25 mg pokipeptid-aoetát (1. példa 38. lépés), 75 mg zselatin. Felhasználás előtt a szárazampulla tartalmát egy külön oldósezr ampullában kiszerelt 5 ml desztillált vízben oldjuk, mely 0,3 mg ecetsavat tartalmaz. 10 15 20 25 30 35 4G 4P 50 55 60 11
