155167. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pektináz levegőztetett mélykultúrában történő bioszintézisére és az enzimfehérje oldatából való kinyerésére
155167 5 6 rált H2 S0 4 -al ismét 3,0-ra állítottuk. A keverő leállítása után az oldatot, 12 órán át 0 C°-on tartottuk, mely idő alatt az enzimfehérje csapadék formájában vált ki. A csapadélkot keretes szűrőprésen szűrtük, majd 1 kg présnedves csapadékra számítva 1000 ml acetonnal vízmentesítettük. A száraz enzimpor aktivitása 112'000 ASP egység volt kilogrammonként. A kinyert száraz enzimmennyiség 10 kg volt. Kitermelés: 57%. 2. példa: 6500 liter csapvízben táptalajt készítettünk, melynek összetevőit az 1. példában ismertettük. A táptalaj ezenkívül tartalmazott még 0,1% a-D-poIigalakturonsav egységekből álló pektinport, melynek észterezettségi fokát HOTTENROTH szerint állapítottuk meg. Az a-.D-poligalakturonsav kariboxileso portjainak metilcsoporttal való észterezettsége 60°/(ros volt. A táptalaj sterilezése 1,4 atü nyomáson, 60 percen át történt. A 28 C°-ra lehűtött táptalajt az Aspergillus alliaceus faj spóráival oltottuk be. A tenyészlevet 80 órán át, óránként 100 m3 levegő befúvásával levegőztettük és szellőztettük, valamint 250 ford./perc fordulatszámmal, lapátkeverővel kevertettük. 0,4 atü üzemi túlnyomás mellett. A keretes szűrőprésen szűrt tenyészlé pektolitikus aktivitását viszkozimetriás módszerrel mértük. A szűrt tenyészlé aktivitása 190 ASP egység volt literenként. A tenyészlé pH-ja ugyanakkor pH 3,2 volt. A mycéliumban a feltárás után található enzimaktivitás 27 ASP egység volt kilogrammonként. 6000 liter szűrt tenyészlé pH-ját az elektromos pH-mérőn mért adatok figyelembevételével koncentrált H2iS04-adagolással pH 3,0 értékre állítottuk be és a szűrt levet 0 C° — +1 C° hőmérsékletre hűtöttük le. Az előkészített tenyészléhez 250 fordulat/perc sebességgel lapátkeverővel való kevertetés mellett 3600 kg ammóniumszulfátot adagoltunk, úgy, hogy 500 kg ammóniumszulfát beadagolása után az oldat pH-ját elektroimetrikus pH-ellenőrzés mellett cc H2 S0 4 -adagolással pH 3,0 értékre állítottuk be. Az enzim izolálásának további lépéseiben az 1. példában leírtak szerint jártunk el. A száraz enzimpor aktivitása 8.900 ASP volt kilogrammonként. A kinyert száraz enzimmenyiség 37 kg volt. Kitermelés 47%. 3. példa: 6500 liter csapvízben táptalajt készítünk, melynek, összetevőit az 1. példában ismertettük. A táptalaj ezenkívül tartalmaz még 0,1% a-D-poligálakturonsav egységekiből álló pefctánport, melynek észterezettségi fokát HOTTENROTH szerint állapítottuk meg. Az a-D-poligalakturonsav karboxilcsoportjainak metilcsoporttal való észterezettsége 85%-os volt. A táptalaj sterilezése 1,4 atü nyomáson, 60 percen át történt. A 28 C°-ra lehűtött táptalajt az Aspergillus alliaceus faj spóráival oltottuk be. A tenyészlevet 72 órán át óránként 100 m3 levegő befúvásával levegőztettük és szellőztettük; valamint 260 fordulat/perc fordulatú lapátkeverővel kevertettük, 0,4 atü üzemi túlnyomás mellett. A keretes szűrőprésen szűrt tenyészlé pektolitikus aktivitását viszkozimetriás módszerrel mértük. A szűrt tenyészlé aktivitása 410 ASP egység volt literenként. A tenyészlé pH-ja ugyanakkor pH 3,1 volt. A mycéliumban feltárás után található enzimaktivitás 39 ASP egység volt kilogrammonként. 6000 liter szűrt tenyészlé pH-ját az elektromos pH-mérőn mért adatok figyelembevételével 20-%-os NH4OH adagolással pH 3,5 értékre állítottuk be és a szűrt levet 0 C° — +1 C° hőmérsékletre hűtöttük le. Az előkészített tenyészléhez 250 ford./pere sebességű lapátkeverővel való kevertetés mellett 3600 kg ammóniumszulfátot adagoltunk úgy, hogy 500 kg ammóniumszulfát beadagolása után az oldat pH-ját elektrometrikus pH-ellenőrzés mellett koncentrált H2 S04-adagolással pH 3,5 értéken tartottuk. Az enzim izolálásának további lépéseiben az 1. példában leírtak szerint jártunk el. A száraz enzimpor aktivitása .20,800 ASP volt kilogrammonként. A kinyert száraz enzimmenynyiség 23 kg volt. Kitermelés: 50%. 4. példa: 6500 liter csapvízben táptalajt készítünk, melynek összetevőit az 1. példában írtunk le. A táptalaj ezenkívül tartalmaz még 1,5% szárított cukorrépaszeletet, A cukorrépaszeletben levő pektin észterezettségi fokát HOTTENROTH szerint állapítottuk meg. A metilcsoporttal való észterezettség fokát 74%-nak találtuk. A táptalaj sterilezése 1,4 atü nyomáson, 90 percen át történt. A 28 C°-ra lehűtött táptalajt az Aspergillus alliaceus faj spóráival oltottuk be. A tenyészlevet 72 órán át, óránként 100 m3 levegő befúvásával levegőztettük és szellőztettük, valamint 250 ford./perc fordulatszámmal, lapátkeverővel kevertettük, 0,4 atü üzemi túlnyomás mellett, A keretes szűrőiprésen szűrt tenyészlé pektolitikus aktivitását viszkozimetriás módszerrel mértük. A szűrt tenyészlé aktivitása 240 ASP egység volt literenként. A továbbiakban az 1—4. példában leírtak szerint jártunk el; az enzimtartalmú lé pH-ját kicsapáskor pH 3,0 értéken tartottuk. A száraz enzimpor aktivitása 11.800 ASP volt kilogrammonként. A kinyert száraz enzimmenriyiség 35 kg volt. Kitermelés: 49,<8%. 10 15 20 25 £0 35 40 45 50 55 60 3
