154935. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A 28829 antibiotikum előállítására
9 esetén a napi adag 2—^5 mg vagy ennek egy töredéke lehet. Az A 28829 antibiotikumot gyógyszerként pl. kiszerelt gyógyszerkészítmények alakjában alkalmazhatjuk. Az ilyen gyógyszerkészítmények 5 a 'hatóanyagot valamely enterális vagy parenterális beadásra alkalmas szerves vagy szervetlen gyógyszerészéti vivőanyaggal kombináltan tartalmazhatják. Vivőanyagként az új antibiotikummal nem reagáló anyagok, mint pl. zsela- 20 tin, tejcukor, keményítő, magnéziumsztearát, növényi olajok, benzilalkoholok vagy más ismert gyógyszerhordozók jöhetnek tekintetbe. A gyógyszerkészítmények pl, tabletta, drazsé, por, végbélkúp vagy folyékony készítmények, mint 10 óidat, szuszpenzió vagy emulzió alakjában készíthetők el. E készítmények adott esetben sterilizálhatok és/vagy segédanyagokat, mint tartósító-, stabilizáló-, nedvesítő- vagy emulgálószereket is tartalmazihatnak. Adhatunk az ilyen 15 gyógyszerkészítményekhez további, gyógyászati szempontból értékes anyagokat is. Az új antibiotikum, felhasználható továbbá fertőtlenítőszerként, tartósítószerként, valamint a növények gombakártevőinek leküzdésére is. 25 A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. E példákban a hőmérsékleti adatok Celsius-fokokban értendők. 1. példa: a) A Streptomyces antibioticus A 28,829 törzset élesztő-ágár táptalajon (összetétel: 4 g élesztőkivonat (Difco), 10 g malátakivonat (Dif- 35 00), 4 g dextróz, 20 g Baetoagar Difco, desztil- . Iáit vízzel 1OO0 ml-re feltöltve) tenyésztjük 28° hőmérsékleten. 14 nap alatt jól spórázó micélium képződig. Ezt fiziológiás konyhasóoldatban szuszpendalj.uk. Az így elkészített spóra- 40 micélium-szuszpenzió 0,5 tf%-nak megfelelő mennyiségével 5i0t0 ml oly tápközeget oltunk foe, amely egy 2 literes Erlenmeyer-lombikJban . 20. g/liter teljes zsírtartalmú szójalisztet és 20 gAiter mannitot tartalmaz vízvezetéki vízben. A 45 szuszpenziót 48 óra hosszat infcubáljuk egy pereenkint 120 lökettel dolgozó rázógépen, 28° hőmérsékleten. b) 1,5 liter fenti módon kapott előkultúrával 30 liter ugyanolyan összetételű, tápközeget ol- 50 tunk be egy 50 literes fermentorban; a közeg pH-értékét a sterilizálás előtt"7,ß-ra állítjuk be; a sterilizálást 20 percig végezzük 125° hőmérsékleten. A percenkint 700—4)00 fordulattal 'ke-, vert kultúrát 72 óra hosszat ínkuMltatjuk 28° 55 hőmérsékleten, 1 atm. túlnyomás alatt, percenkint 30 liter levegővel szellőzve a kultúrát.. Ezután, a micéliumot "vákuum-szűréssel elkülönít- . jük a tápközegtől és az A 28829 antibiotikumot az alább leírt eljárással különítjük el a micé- 60 liumokból. c) Egy a b) alatt leírt módon, de csak 36 órai inkufoálással nyert kultúrát egy nagyobb, 300 liter tápközeget tartalmazó fermentor beoltására használunk fel; az inokülumot 1 :20 g5 10 mennyiségi arányban alkalmazzuk és az így kapott kultúrát azután egy 3000 liter tápközegét tartalmazó fermentor beoltására alkalmazzuk, ugyancsak 1 : 20 tf. arányban. _ d) 3200 liter kultúra-közeget, amelynek pH-értéke 6,3, 64 kg HyfkHSupercel szűrőanyaggal keverünk és leszűrjük. A kapott tiszta szűredéket kiselejtezzük. A mioélium és a szűrőanyag nedves keverékét 640—1640 liter 80%-os vizes acetonnal kétszer elkeverjük, egyenként 30 perces időtartammal, majd mindegyik művelet után centrifugálással elkülönítjük a folyadékot. Az így kapott I960 liter folyadékot kíméletes bepárlással mentesítjük az acetontól, az 550 liter maradékhoz 82,5 kg nátriumkloridot adunk, majd 5,9 pH-értéken 3 : 1 tf. arányban alkalmazott etilacetáttal, ellenáramú extraktorban extraháljuk. A vizes maradékhoz ismét 82,5 kg nátriumkloridot adunk és ugyanígy újból extraháljuk. Az egyesített kivonatot, amelynek térfogata 570' liter, kíméletesen 10 liter térfogatra töményítjük be. A kapott olajszerű maradékot 50 liter petroléterlben (fp. 50—70°) oldjuk és a petrolóteres oldatot 6—6 liter 85%-os metanollal 8j szor extraiháljük. A teljes antibioticus aktivitású anyag a metanolos kivonatokiba megy át. Az egyesített kivonat szárazra történő bepárlása útján 640 ,g nyers A 2i8829 antilbiotilku•mot kapunk. 2. példa: Az 1. példa b) pontjában leírt módon kapott micéliumot 100—lOOlO ml etilacetáttal háromszor extraháljuk, az egyesített kivonatot 500 ml térfogatra töményítjük be, majd a koncentrátumot híg ecetsavval, vízzel, híg .nátriumhidrogénkarbonát oldattal majd ismét vízzel 3—3 alkalommal kirázzuk. Az etilacetátos oldatot vízmentes nátriúmszulfáton szárítjuk, majd vákuumban szárazra pároljuk be. A maradék Botrytis cinerea organizmussal történő vizsgálat tanúsága szerint a kultúra-közeg csaknem teljes antibiotikus aktivitását tartalmazza. 7,09 g maradékot Craig^megosztásnak vetünk alá 100 fokozatban. Az e célra alkalmazott oldószerj rendszer 3 liter széntetrakloridra 2,55 liter metanolt és 0,45 liter vizet tartalmaz. Az anyagot 150 ml oldószereleggyel a teljesen önműködő berendezés első három edényébe öntjük. Az antibiotikum 10—^22. fokozatokban dúsul fel. Ezeket a frakciókat egyesítjük és. vákuumban szárazra pároljuk be. Ily módon 2,39 g barnás színű szilárd habszerű anyagot kapunk, amely éterrel felvéve messzemenően kikristályosodik. 3. példa: 20 g nyers antibiotikumot absz. kloroformban oldunk és egy 500 g kovasavgélt tartalmazó' oszlopon kromatografáljuk. Az antibiotikumot azután kib. 2000 ml etilacetáttal eluáljuk. 200 ml térfogatra történő bepárlás során 14,75 g színtelen kristályos antibiotikum válik ki. Az 5
