154859. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dekapeptidek előállítására az adrenokortikotrop hormon molekula első tíz aminosav-gyökének szekvenciájával a molekula N-végződésétől számítva
154859 9 10 Olyan szabad dekapeptidek előállításán kívül, amelyekiben legalább a fenilalamin-gyök D-konfigurációjú, a találmány ezek funkciós származékainak előállítására is vonatkoznak, így az alábbiakra: 5 a) a kairboxil-csoportok fém- és ammóniumsóira, különösen a vízoldható sókra, valamint az NH2 ^csoportok addíciós sóira szervetlen savakkal, így sósavval, hidrogénhromiddal, kénsavval, foszforsawal és szerves savakkal, így 10 ecetsavval, borostyánkősavval, malonsawal, tejsavval, borkősavval, citromsawal, benzoesavval és alifás vagy aromás szulfonsavakfcal; fo) az N-végződésű acil-vegyületefcre, így az acetil- és foenzoil-származékokra; 15 c) a karfooxilcsoportok észtereire, pl. rövidszénlánicú alifás alkoholokkal képezett észterekre ; d) a karboxilcsoportok savaimidjaira, így a glutaminsav y-kanboxil-icsoportjának amidjára 20 és különösen a C-végződésű glicin amidjára; e) azokra a peptidefcre, amelyekben az NH2 csoport blokkolva van pl. tozil-, tiritil-, Ibenziloxikarbonil- vagy terc.butiloxikairbanil-csaporttal; 25 f) azokra a rosszul oldódó komplex vegyületekre, amelyek az alábbi fémek: cink, nikkel, kobalt, réz és vas közül egynek vagy többnek a gyógyászatilag elfogadható, rosszul oldódó sójából, hidroxidjából vagy oxidjából és a jelen 30 peptidefcből állnak. Ezeket a komplex vegyületeket az jellemzi, hogy rosszabb hatásúak a megfelelő dekapeptidnél. A fém és peptid (1 : 1) és (100 : 1) közötti súlyarányai bizonyultak előnyösnek. 35 A találmány szerinti dekapeptidek és származékaik gyógyászati célra alkalmas alakban vihetők beadáshoz megfelelő ismert segédanyagok segítségével, például tablettákká alakíthatók enterális, szublingvális vagy oromukozális 40 adagoláshoz, vagy injektáláshoz megfelelő formában, pl. oldatként, emulzióként vagy szuszpenzióként. Erre a célra felhasználhatók a hagyományos segédanyagok. A gyógyszerként való alkalmazáson kívül 45 ezek a dekapeptidek közbenső termékként is felhasználhatók hosszabb szénláncú aminosavakat, pl. ACTH-Jhatású peptideket tartalmazó gyógyszerek előállítására. A következő példákban néhány dekapeptid 50 szintézisét adjuk meg a találmány szerinti eljárással. 1. BOC-D-Phe-ONP 1. példa: 7-O^Phe-dekapeptid előállítása az előző oldalon levő vázlat szerint. 55 Ebben a vázlatban az aminosavakat általános rövidítésükkel jelöltük. Az összes optikai- 60 lág aktív aminosav gyök a fenilalanin kivételével L-konfigurációjú. Ezenkívül a következő rüvidítéseket alkalmaztuk: BOC: t-foutiloxikarbonil, PN: p-nitrofemil, Me: metil, Z: benziloxikarbonil, tBu: t-butil. g5 37 g BCOD^Phe-OH és 19,3 g p-nitrofeno! 100 ml etilacetáttal készült oldatához 28,1 g dicikloihexil-fcarbodiimid 100 ml etilacetáttal készült oldatát adjuk. A reakcióelegyet keverés közben 1 órán át —5 C°-on, majd 2 óra hoszszat szobaihőífokon állni hagyjuk. Ezután a keveréket leszűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot etilacetátiból átkristályosítjuk. Így 40,1 g észtert nyerünk (kitermelés 80%); olvadáspont: 128—128,5 C° és [a]D : +22,3° dimetilfonmamidban. 2. BOC-D-Phe-nArg(N02 )-T!ry-Gly-OMe 55,2 g H-Arg(N0 2)-Try-Gly-OMe-2,l HCl 300 ml 0 C°~os dimetilformamiddal készített oldatában 38,6 g BOC-D-Phe-ONP-t oldunk. 29,4 ml trietila,min hozzáadása után a keveréket 1 órán át 0 C°-on és egy éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. Vákuumban végzett bepárlás után a megmaradó olajszerű anyagot 700 ml etilacetátban oldjuk, majd egymást követően 5%-os citromsav-oldattal, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonátoldattal, vízzel és 5%-os citroimsavoldattal és vízzel mossuk, ezután szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A nyert maradékot 100 ml etanolban oldjuk, és ezt az oldatot gyors keverés közben 1 liter abszolút éteribe öntjük, leszűrjük, majd szárítjuk. Ilyen módon 60 g tetriaipeptidésztert kapunk (kitermelés 80%); [Ű]D = —43,3° metanolban. 3. H-D-Phe-Arg(N02 )-Try-Gly-OMe • HCl 48 g a 2. lépésben ismertetett módon előállított BOC-tetrapeptidet 500 ml abszolút etilaoetát és 100 ml nitrametán keverékében szuszpendálunk. 105 ml 6 n HCl etilacetáttal készült oldatának hozzáadása után először az összes anyag feloldódik, majd olajszerű anyag válik le, amely hamar megszilárdul. 1,5 óra hosszat tartó keverés után a csapadékot leszűrjük. Hozam: 44,5 g (94%). Ebben az esetben a termék 1 mól tetrapeptidre vonatkoztatva 2 mól sósavat tartalmaz. 4. Z-Glu(OtBu)-His-D-.Phe-Arg(N02 )-Try-Gly-OMe 336 g H-D-Phe-Arg(NQ2 )-Try-Gly-OMe-l,45 HCl 30 ml 0 C°-os dimetilformamiddal készült oldatához 0,72 g trietilamint, majd 0,08 ml ecetsavat és végül 3 g Z-GluíOtBxO-His-iNs, 49 ml etilacetáttal készült oldatát adjuk. 60 órán keresztül 0 C°~om állni hagyjuk, ezután a reakciókeveréket vákuumban bepároljuk és az így kapott oldatot 500 ml vízbe öntjük. A keletkező csapadékot kétszer 200 ml etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist semlegesre mossuk, majd szárazra pároljuk. A maradékot etilacetáttal felforraljuk. Így 3,16 g védett hexapaptidésztert nyerünk (kitermelés 58%); olva-5
