154859. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dekapeptidek előállítására az adrenokortikotrop hormon molekula első tíz aminosav-gyökének szekvenciájával a molekula N-végződésétől számítva
154859 11 12 dáspont: 128 C°; [a]D : —14,6° dimetilformamidban. 5. Z-Glo(OtBu)-His-D-Bhe-Arg(N02 )-Try-Gly-OH A 4. lépés szerinti módon előállított 3,04 g Z-lhexapeptidészter.t 40 ml dioxán és 10 ml víz keverékében oldunk. 3,1 ml 1 n lúg hozzáadása után az észter 35 perc alatt elszappanosodik. Ezután 3,2 ml 1 n sósavat és 300 ml vizet adunk a reakciőelegyhez, aminek eredményeként csapadék válik le. A csapadékot leszűrjük, mossuk, és vákuumban 30 C°-on szárítjuk. Ilyen módon 2,65 g Z-hexapeptidsavat nyerünk (kitermelés: 88%); [ajp: 18,4° dimetilfomia/midban. 6. H-Glu(OtBu)-His-D-Phé-Arg-Try-Gly-OH Az 5. lépés szerinti módon előállított 2,5 g Z-4hexapeptidsavat 40 ml 90%-os ecetsavban szuszpendálunk. Ezután 400 mg 10% palládiumtartalmú szén-katalizátort adunk a szuszpenzióhoz, majd a keveréket 48: órán keresztül 20 C°on és 3 atm. túlnyomáson hidrogénezzük. Ezután a reakcióterméket vákuumban szárazra pároljuk és 250 ml abszolút étert adunk hozzá. Piros színű csapadék képződik, amelyet éterrel mosunk, majd szárítunk. így 2 g hexapeptidet nyerünk; [a]o = 0° dimetilformamidban. 7. BOC-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-D-Fbe-Arg-Try-Gly-OH 4,4 g BOC-Ser-Tyr~Ser-Met-N2 H s -ból és nátriúimnitritlből ismert niódon azidot készítünk, majd a 6. lépés szerinti eljárással előállított 5,1 g hexapeptid 75 ml 0 C°-os dimetilformamiddal készített oldatához adjuk. Ehhez az oldathoz 0,6 g trietilamint adunk, és a keveréket 4 napig 0 C°-on állni hagyjuk. Ezután szárazra pároljuk, és a reákcióterméket karboximetilcellulózzal töltött oszlopon kromatografáljuk. Az anyagot t-butanol-víz 1:1 arányú keverékével futtatjuk és híg ecetsav oldattal eluáljuk. Ilyen imádom 1,8 g védett dekapeptidet nyerünk. A tennék Stein és Moore-féle aminosav-analízisének eredményeit az alábbi, táblázat mutatja mólszázalékban kifejezve. 4. táblázat His Arg. Ser Glu Gly Met Tyr Fhe 90,3 85,3 89,6 90,5 95,7 85,9 94,0 92,3 mól% 8. 7-D-Phe-dekapeptid 450 mg védett dekapeptidet 10 ml trif luorecetsav és 1 ml víz keverékének 2 ml-ében oldunk. 1 óra múlva a Vörös. színű oldatot szárazra pároljuk, majd a maradékot t-butanolvíz 1:1 arányú keverékével vesszük fel, és acetát-formájú ioncsérélővel kezeljük. Ezt követően az oldatot leszűrjük és liofilizáljuk. A 7-D-Phe-dekapeptidet 392,4 mg termeléssel kapjuk. 2. példa: 2-D-Tyr-7-D-Bhe-dekapeptid előállítása. 1. BQC-íSer-D-Tyr-OMe 29,1 g BOC-Ser-OH diciklohexilaniin sóját és 17,5 g H-D-Tyr-OMe-HCl-t 94 ml dimetilformainid és 470 ml acetonitril keverékében szuszpendálunk. A szuszpenziót 30 percen át keverjük 20 C°-on, majd —2 C°-ra hűtjük. A reakcióelegy hőmérsékletét 0 C° alatt tartjuk, és 15,5 g dieiklohexilkarbodiimid 57 ml acetonitrillel készült oldatát adjuk hozzá. A reakcióelegyet 4 órán keresztül 0 C°-on, majd szobahőmérsékleten keverjük, majd leszűrjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban felvesszük, és 5%-os citromsav-oldattal, vízzel, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk. Szárítás után 25,3 g anyagot nyerünk, amely további tisztítás nélkül felhasználható a következő lépéshez. 2. BOC-Ser-D-Tyr-N2 H 3 Az 1. lépés szerinti niódon előállított 10,7. g nyers dipeptidet 70 ml metanolban oldunk, 2,8 ml hidrazinhidrátot adunk hozzá, majd a keveréket egy éjjelen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 5 ml víz hozzáadása után a képződött csapadékot leszűrjük. A hidrazidot t-butanol-víz 1 : 1 arányú elegyéből átkiristályosítjuk. Termelés 3,3 g (31%), olvadáspont 120 C° bomlással; [a]o = —4,0° dimetilformamidban. 3. BOC-SerJD-Tyr-Ser-Met-OMe A 2. lépés szerinti módon előállított 3,6 g hidrazidot 17 ml 0 C°-os 2 n sósavban oldunk, és 0,69 g nátriumnitrit 3 ml vízzel készített oldatát, majd 15 ml 0 C°-os dimetilforimamidot adunk hozzá. 8 percen át rázzuk a reakcióelegyet, majd 20 ml vízzel és 20 ml 2 n káliumkarbonáttal hígítjuk. Ezt követően a keveréket háromszor 20" ml etilacetáttal extraháljuk. Az összegyűjtött extraktumokat vízzel kétszer mossuk. Eközben 1,9 g H-Ser-Met-OMe-t 5 ml 0 C°-os dimetilfoinmamidban szuszpendálunk. Az azid-oldatot hozzáadjuk, majd a keveréket 74 órán át 0 C°-on tartjuk, majd vízzel mossuk, szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradék olajszerű anyag, amely nem kristályosítható. Termelés: 3,2 g (56%); [OL]D = — 32,0° metanolban. 4. BOC-Ser-D-Tyr-Ser-Met-N2 H 3 A 3. lépés szerinti eljárással előállított 1,9 g tetrapeptidésztert 10 ml metanolban oldunk. Az oldathoz 0,32 g hidrazinhidrátot adunk, és a reakcióelegyet 60 órán keresztül szobahőmér-10 15 20 25 30 33 40 45 50 55 80 8
