154657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására

15465? Á3C rendszer: terc.amilalkahal-izopropanol-víz (100 : 40 : 55), 52 rendszer: n-foutanol-jégecet-víz (100 : 10 :30), 52A rendszer: n-butanol-jégecet-víz (67 : 10 : 23), 100 rendszer: etilacetát^piridin-jégecet-víz (62 :21 :6 : 11), 101 rendszer: n-butanol-^piridin-jégecet^víz (30 : 20 : 6 : 24). A példákban az alábbi rövidítéseket alkalmaztuk a védőcsoportok megjelölésére: Z =• fearbobenzoxi-csoport, BOC = tercbutiloxiktarbonil-csoport, tBu = tercbutil-osoport. 1. példa: 1. Z-Lys(BOC)-Lys<BOC)-NH2 5 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OCH3

100 ml absz. metanollal készített oldatát szobahőfokon ammónia-gázzal telítjük és zárt lombikban 30 óra hosszat állni hagyjuk. Az oldatot azután kb. 25 ml térfogatra pároljuk be és kristályosítás céljából éjjelen át hűtőszekrénybe állítjuk. A levált kristályokat szűréssel elkülönítjük, kevés hideg metanollal mossuk, majd vákuumban megszárítjuk. Az így kapott 3,95 g Z-Lys(BQC)-Lys(BOC)-NH2

165°-on olvad. A vegyület szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálás során az alábbi R/-értekéket mutatja: 10 15 20 25 30 R/ (kloroform-metanol = 95 : 5) =0,11 R/ (kloroform-metanol = 8:2) = 0,75 R/ (43A) = 0,76 A fenti eljárás során kiindulóanyagként felhasználásra kerülő Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-OCH3 78—84D

-on olvad; előállítása Z-Lys(BOC)-OH-foől és H-Lys<BOC)-OCH3-ból történik, diciklohexil-karbodiimides kondenzációval (vö. 594 338 belga szabadalmi leírás). 2. H-Lys<BOG)-Lys(BOC)-NH2 3 g Z-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2

100 ml metanollal gyenge melegítés közben készített oldatához 500 mg 10%-os palládiumos aktívszén-katalizátort adunk és rázókacsában, a képződő széndioxid abszorbeáltatása mellett, szobahőfokon hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel kb. 1 óra alatt befejeződik, további 1 óra múlva a katalizátort kiszűrjük és a szűredéket szárazra pároljuk be. A mennyiségi hozammal kapott nyers terméket etilacetát és perklóréter elegyéből átkristályosítjuk; a termék 110—112°-on olvad. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálással az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (kloroform-metanol = 8:2) = 0,32 R/ (43A) =0,35 R/ (52) =0,65 65 35 40 45 50 55 60 8 3. Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys<BOC)-Lys(BOC}-JiíH2 5,13 g Z-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NHNH2 (előállítva az

1,214.242 sz. NSzK szabadalmi leírásban ismertetett módon) 60 ml absz. dimetilf ormamiddal készített oldatát —250 hőmérsékletre hűtjük le. Ezen a hőfokon keverés köziben, cseppenként hozzáadunk 8,8 ml 2,115 n sósav oldatot, majd ezt követően 0,973 ml 5 n nátriumnitrit oldatot. A reakcióelegyet 15 percig keverjük —20° hőmérsékleten, majd hozzáadjuk 2,0 g H-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2

10 ml dimetilformamiddal készített és —10° hőmérsékletre lehűtött oldatát, majd 2,6 ml trietilamint csepegtetünk az elegyhez. A reakcióelegyet 0° hőmérsékleten 30 percig keverjük, majd ugyancsak 0° hőmérsékleten kb. 20 óra hosszat állni hagyjuk. A nyers termék elkülönítése céljából a reakcióelegyet kb. 30 ml térfogatra pároljuk be, 150 ml vizet adunk hozzá, a kivált pelyhes-kocsonyás csapadékot leszűrjük és 2:1 arányú metanol-víz elegyből kétszer átkristályosítjuk. Ily módon finom kristályos, kromatográfiailag tiszta állapotban kapjuk a védett oktapeptidet, amely 220—221°-on bomlás közben olvad. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálással az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (kloroform-metanol = 9:1) == 0,47 R/ (43A) =0,75 4. H-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 1,0 g fenti módon kapott karbobenzoxi-vegyületet 250 ml metanolban oldunk, 200 mg 20%os palládiumos aktívszén-ikatalizátort adunk hozzá és rázókacsában, a képződő széndioxid elnyeletése közben szobahőmérsékleten hidrogénezzük. 6 óra múlva a katalizátort kiszűrjük, a szűredéket szárazra bepároljuk és a maradékot metanol és víz elegyéből még kétszer átkristályosítjuk. Ily módon 738 mg kromatográfiailag egységes oktapeptid-származékot kapunk. Szilikagélen az alábbi R/-értékeket kapjuk: R/ (klorofornnmetanol: R/ (52) R/ (43A) . 9:1) = 0,14 = 0,63 = 0,28 5. BOCJ3-Ser-Tyr-iSer-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Try-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 988 mg BOC-D-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-(OtBU)-His-PheHArg-Try-Gly-OH és 736 mg H-Lys-(BOC)-Pro-Val-Gly-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-Lys(BOC)-NH2 20 ml piridinnel készített szuszpenziójához 0,3 ml vizet és 0,835 ml n sósav oldatot adunk, majd az elegyet 15 percig keverjük 50° hőmérsékleten. 378 mg diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá, majd további