154387. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-halogén-7-dezoxi-lincomicin és 7-halogén-7-dezoxi-epilincomicin-származékok előállítására
154387 11 12 Talált: C = 39,64%, H = 6,19%, N = 5,07%, S = 6,04%, Br = 28,59%. aD = -|nll4° i(C = 0,9314, vízben). A bróm helyett egyéb halogéneket is alkalmazhatunk, így pl. klórt, amikoris 7-klór-7-dezoxi-lincomicint kapunk. Ez a termék azonos azzal, amely a lincomicin tionilkloriddal történő klórozásával nyerhető. A trifenilfoszfin helyett trifenilfoszfitot is használhatunk, ebben az esetben halogén helyett metilhalogenidet alkalmazunk. A lincomicin helyett egyéb lincomicin származékokat, illetve lincomicin analóg vegyületeket is felhasználhatunk. így lincomicin helyett lincomicin C-t használva 7-bróm-7-dezoxi-lincomicin C-t kapunk. B) Lincomicin C előállítása. A lincomicin C-t úgy kapjuk, hogy a lincomicint etántiollal (etil-merkaptán) reagáltatjuk dietil-ditioacetállá, majd a reakcióelegyet p-toluolszulfonsav jelenlétében melegítjük, illetve olvadásig hevítjük. Az eljárást a következőkben írjuk le. B)l. 6,8-didezoxi-'6-i(transz-l-metil-4-propil-L-2^pirrolidinkarboxamido)-D-eritro-D-galakto-^aldehido-októz-dietilditioacetál. (XVII.) képlet. 1 literes háromnyakú lombikba 150 ml konc. sósavat és 50 ml előzetesen 0 C°-ra lehűtött etántiolt mérünk be, majd hozzáadunk 15,0 g lincomiein-hidrokloridot. Az anyagot ezután szobahőmérsékleten 5 órán keresztül mágneses keverővel keverjük, majd azonos térfogatú jeges vízzel hígítjuk és alaposan extraháljuk Skellysolve B-vel (technikai hexán), majd ezeket az extraktumokat elöntjük. A sav nagyobb részét úgy semlegesítjük, hogy óvatosan 100 g szilárd káliumhidroxidot adunk a reakcióelegyhez erős keverés közben, miközben a hőmérsékletet acetonos-szár az jeges hűtéssel 20—30 C° között tartjuk. A szilárd káliumkloridot szűréssel eltávolítjuk és kloroformmal alaposan kimossuk. A szűredékhez további kloroform mennyiséget (kb. 150 ml-t) adunk és a reakcióelegyet mágneses keverővel keverve a pH = 10 érték eléréséig 2 n vizes nátriumhidroxid oldattal elegyítjük. A kloroformos réteget elválasztjuk, a vizes fázist kloroformmal kimerítően extraháljuk, majd az egyesített kivonatokat két ízben vízzel mossuk és vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk. Az oldószert 30 C°-on vákuumban eltávolítjuk és így félig szilárd maradékot kapunk, amely acetonból kristályosítva 5,41 g 6,8-didezoxi-6-{transz-l-metil-4-propil-L-2-pirrolidinkarboxamido)-D-eritro-D-galakto-aldehido-októz-dietilditioacetált eredményez színtelen lapos tűkristályok formájában, op. 130—132 C°. Az anyalúg betöményítésével további 1,5 g anyagot kapunk, ennek olvadáspontja 129—131 C°. A teljes kitermelés 6,91 g, (42,4%). Analízis: C21 H 42 N 2 0 6 S2 képlet alapján. b) A B)l. pont szerint előállított ditioacetált 260 C°-ra hevítjük 3 percen át, mimellett etilmerkaptán keletkezik, amely szagáról felismerhető. A kapott anyagból a B)2. a) pontban leírt kromatográfiás tisztítással lincomicin C-t állíthatunk elő. C) Lincomicin C előállítása fermentációs úton. A lincomicin C hidrokloridját a következőképpen állítjuk elő: Yeastolac1 10 g Glükóz-monohidrát 10 g N-Z-amine—Bu 5 g Csapvíz q.s. 1 1 1 A Yeastolac élesztősejtek hidrolizátuma. 11 Az N-Z-amine—B. Sheffield szerint enzimatikusan lebontott kazein. A fent leírt tenyészetből 5%-ot (azaz 5 ml-t) adunk egy 30 db 500 ml-es Erlenmeyer-lombikból álló sorozat minden egyes tagjához beoltás céljából, a lombikok 100 ml fermentációs folyadékot tartalmaznak, melynek összetétele a következő: 10 15 20 25 30 S5 40 45 50 E5 60 10 15 20 25 30 S5 40 45 50 E5 60 Számított: C = 52,25%, H = 8,77%, N = 5,81%, S = 13,29%. • Talált: C = 52,38%, H = 8,71%, N = 5,93%, S = 13,46%. B)2. Gyűrűzárási reakció lincomicin C előállítására. 10 a) Egy rész a B)l. pont szerint előállított dietilditioacetált és egy rész p-toluolszulfonsav-monóhidrátot 25 rész acetonitrillel addig forralunk visszafolyatás közben, amíg az anyag 15 baktériumellenes hatásúvá válik. A reakcióelegyet lehűtjük és szárazra pároljuk, majd szilikagélen" kromatografáljuk, etilacetát, aceton és víz 8:5:1 arányú elegyével. A 102—131. frakció baktériumellenes hatást mutatott. Ezekből a 20 105—125. frakciót egyesítjük és szárazra pároljuk, majd sósavval megsavanyított acetonból kristályosítjuk. Az anyagot végül átkristályosítjuk oly módon, hogy vízben oldjuk és acetonnal kicsapjuk a lincomicin C hidrokloridját, a 25 kristályok 149—153 C°-on olvadnak. Fermentáció. 40 Egy sorozat 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba a következő összetételű és előzetesen 7,3 pH-n sterilizált oltótáptalajból 100 ml-es adagokat bemérünk, majd beoltjuk ferde táptalajon te-45 nyésztett Streptomyces lincolnensis var. lincolnensis NRRL 2936 törzzsel. 55 A mikroorganizmusokat 2 napon át 28 C°-on Gump-féle körforgó rázóberendezésben 250 ford./perc fordulatszámmal tenyésztjük. e
