154337. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek tisztítással egybekötött betöményítésére

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY Bejelentés napja: 1966. IV. 05. (GO—980) Közzététel napja: 1967. VIII. 22. Megjelent: 1968. VI. 15. 154337 Szabadalmi osztály: 30 h 1—8 Nemzetközi osztály: A 61 k Decimal osztályozás: Feltalálók: Dr. Kelemen Ágnes gyógyszerész, 60%, Dr. Tolnay Pál vegyészmérnök, 20%, Dóra Sándor vegyészmérnök, 20%, Budapest Tulajdonos: Gyógyszerkutató Intézet, Budapest Eljárás kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptidek tisztítással egybekötött betöményítésére \ A találmány tárgya eljárás nagy tisztaságú és koncentrációjú kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptid készítmények előállítására tisztított állati szervkivonatokból. Ismeretes, hogy számos állati szerv, így pél- 5 dául tüdő, máj, pankreász, lép, vese, parotisz, szubmaxilláris mirigy, gyomor, bél, izom tartalmaz kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptideket. Ezek a polipeptidek tisztán előállítva terápiásán jól alkalmazhatók a 10 pancreatitis kezelésében, valamint hasi műtét- v teknél profilaktikusan. A terápiás alkalmazásra kerülő készítménnyel szemben fontos követelmény, hogy nagy tisztaságú és megfelelő töménységű legyen. Ez utóbbi követelmény biz- 15 tosítása azért lényeges, mert terápiás felhasználás esetén előnyös, ha kis oldatmennyiségekkel nagy mennyiségű ilyen hatóanyagot tudnak a szervezetbe bejuttatni. Számos eljárás ismeretes ilyen hatóanyagokat 20 tartalmazó tisztított állati szervkivonatok tovabbtisztítására és betöményítésére. Az 1 179 333 sz. NSzK szabadalom szerint meghatározott pH-tartományban vizes oldatból csersavval kicsapják az előzőleg már tisztított és fehérjementesí- 25 tett polipeptideket. A fehérjementesítést triklórecetsavval, szulfoszalicilsavval vagy perklórsavval végzik. Az így kapott, vízben oldhatatlan csapadékot 1 n HCl-ben oldják, majd a kicsapószer feleslegét és az oldáshoz használt sósavat 30 úgy különítik el az aktív polipeptidektől, hogy az utóbbiakat aceton hozzáadásával kicsapják és a csapadékot vízben oldják. Az 1146 616 sz., az 1 155 563 sz., az 1181370 sz. és az 1 181 371 sz. NSzK közzétételi iratokban leírt eljárások szerint a kallikrein-inhibitor és tripszin-inhibitor hatású polipeptideket előzőleg szulfoszalicilsavval vagy triklórecetsavval már fehérjementesített oldatokból metafoszforsawal vagy polifoszforsavval kicsapják, a csapadékot vizes lúg- vagy só-oldattal feloldják, kation- és anioncserélő műgyantával ionmentesítik, majd vákuumbepárlássál és liofilezéssel betöményítik. Az 1 084 433 sz. NSzK szabadalom szerint az állati szervekből vízzel elegyedő szerves oldószerrel sók jelenlétében kivonják az aktív polipeptideket, majd azokat aceton hozzáadásával a kivonatból kicsapják, a csapadékot vízben oldják, és szulfoszalicilsav hozzáadásával az oldatból kicsapják a szennyező fehérjéket. Az így kapott oldatot kation- és anion-cserélő műgyantával ionmentesítik. A fenti módszerek megvalósítása több szempontból hátrányos. A metafoszforsawal, polifoszforsavval vagy csersavval kicsapott polipeptidek vízben nem oldódnak, csak lúg-, só- vagy sav-oldatokban. Ez utóbbiak eltávolítása az oldás után újabb műveletet igényel, amely az oldat térfogatát is jelentősen megnöveli. A csersavas 154337