154327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum előállítására
11 154327 12 ki, pl. olymódon, hogy valamely S. cinnamonensis törzset röntgen- vagy ibolyántúli sugárzás vagy vegyi anyagok, pl. nitrogén-mustárok behatásának teszünk ki. 1. példa: Az A3823 antibiotikum rázópalackos kultúrában történő termelését az alábbi eljárás szemlélteti : A Streptomyees cinnamonensis ATCC 15 413 törzs spóráit oly ferde ágár-táptalajra oltjuk, amelyet az alábbi anyagokból készítettünk: kazein-aminosavak glicerin dextrin fekete melasz élesztő „20V9" K2 HP0 4 ásványisó-törzsoldat agár 5 g 5 g 5 g 10 g 5 g 1 g 5 ml 20 g csapvízzel 1 liter össztérfogatra feltöltve. Az ásványisó-törzsoldat literenként az alábbi anyagokat tartalmazza: KCl MgS04 • 7H2 0 FeS04 tömény sósav 100 g 1.00 g 2 g 2 ml A spóra-inokulum tenyésztésére alkalmazott tápközeg pH-értékét 7,6 és 7,8 közöttire állítjuk be. A beoltott ferde ágárt kb. 5 napig inkubáltatjuk kb. 30 C° hőmérsékleten, majd kismennyiségű steril desztillált vízzel rétegezzük felül és gyengén kaparjuk, hogy a mikroorganizmusokat fellazítsuk és vizes szuszpenziót készítsünk belőlük. Az így kapott szuszpenzióból 1 ml-t alkalmazunk a vegetatív inokulum-kultúra tenyésztésére alkalmazott táptalaj 100 ml-jének beoltására. Ez utóbbi táptalaj az alábbi összetételű: cerelóz (glükóz-készítmény) 15 g szójaliszt 15 g kukoricalekvár 5 g nátriumklorid 5 g kalciumkarbonát 2 g vízzel feltöltve • 1 literre. A fenti öszetételű tápközeget kb. 120 C° hőmérsékleten, kb. 1 atm. túlnyomás alatt, kb. 30 percig sterilizáljuk a beoltás előtt. A beoltott tápközeget azután kb. 48 óra hosszat rázatjuk kb. 30 C° hőmérsékleten, 5 cm lökettel, percenként 108 löketnek megfelelő sebességgel rázatott alternáló rázóasztalon. A fenti módon kitenyésztett vegetatív inokulum-kultúra 5 ml adagjait alkalmazzuk az 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokban elhelyezett és sterilizált termelő tápközeg 100 ml-es adagjainak beoltására. A termelő tápközeg összetétele az alábbi: cerelóz melasz pepton kalciumkarbonát vízzel feltöltve 10 g 20 .g 5 g 2 g 1 literre. A beoltott termelő kultúrát kb. 5 napig rázatjuk 26 C° és 30 C° közötti hőmérsékleten, a fent leírt rázóasztalon. Ennek az időnek az el-10 teltével a rázópalackok tartalmát összeöntjük, a kapott fermentációs levet Büchner-tölcséren, szokásos kereskedelmi minőségű szűrési segédanyag alkalmazásával leszűrjük. A megszűrt fermentációs levet 5 n sósavval kb. 3 pH-ér-15 tékre állítjuk be, majd kloroformmal kétszer extraháljuk. Az egyesített kloroformos kivonatot szárazra pároljuk be, a maradékot ismét feloldjuk kloroformban és az oldatot megszűrjük. A szűredéket egy 12—40 szitafinomságú 20 aktívszénnel („Pittsburgh Cal" minőség, a Pittsburgh Coke and Chemical Co., Neville Island, Pa. cég gyártmánya) megtöltött, 48 cm magas, 2 cm átmérőjű, kloroformmal előzőleg átmosott oszlopon bocsátjuk keresztül. Az anti-25 biotikumot tartalmazó szűredék lefolyása után további 1 liter kloroformot folyatunk át az oszlopon. Azokat a frakciókat, amelyek a minőségi próba szerint antibiotikum-tartalmat mutatnak, egyesítjük és szárazra pároljuk be, 30 majd a maradékot ismét feloldjuk 10 rész metanol és 1 rész víz elegyében. A kapott antibiotikum-oldatot melegítjük, majd hűtő-helyiségben állni hagyjuk. Az antibiotikum a metanol egy részének elpárolgása közben lassan 35 kikristályosodik. A kristályokat centrifugálással elkülönítjük, hideg vízzel mossuk és vákuumszárítószekrényben megszárítjuk. Az így kapott antibiotikumot éter és petroléter elegyéből átkristályosítjuk és vákuumban megszárítjuk. 40 2. példa: Az A382i3 antibiotikum kísérleti üzemi méretben való termelését az alábbi eljárás szem-45 lélteti: Egy kétliteres lombikba, amely 800 ml alábbi összetételű tápközeget tartalmaz 50 55 60 65 kukoricakeményítő nátriumklorid pepton húskivonat élesztőkivonat desztillált vízben 1 % 0,5 % 0,5 % 0,5 0/o 0,25% beviszünk inokulumként egy az 1. példában leírt módon a ferde ágár-táptalajos kultúrából készített szuszpenziót. Az így kapott vegetatív kultúrát kb. 28 C° hőmérsékleten 29 óra hoszszat inkubáltatjuk 5 cm löketű, percenként 2.50 lökettel dolgozó rázóasztalon. Az így előállított vegetatív kultúra 50 ml-es adagjait alkalmazzuk inokulumként és ezzel egy 44 literes tartályban levő, alábbi összetételű, 120 C° hőmér-6
