154327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antibiotikum előállítására
13 154327 14 sékleten előzetesen 30 percig sterilizált tápközeget oltunk be: oldható keményítő élesztőkivonat pepton nátriumklorid húskivonat 1 % 0,5% 0,5% 0,5% 0,5% A tápközeget e tartályban 28 C° hőmérsékleten 24 óra hosszat inkubáltatjuk a beoltás után. 8 óra elteltével kezdjük a tápközeget keverni percenként 370 fordulatszámú keverővel. Az első 8 órában percenként 0,4 m3 levegővel szellőztetünk, azután a szellőztetés ütemét percenként 1,4 m3 -re növeljük. Az ily módon kitenyésztett inokulum-kultúrát azután egy 1000 literes fermentoi'ba visszük át, amely az alábbi összetételű sterilizált vizes tápközeget tartalmazza : % cukornád-melasz 1 cerelóz (glükóz-készítmény) 1 70 szójadara 0,5 % kalciumkarbonát 0,2 % habzásgátlószer 0,02% A fermentor hőmérsékletét a fermentáció folyamán mindvégig kb. 30 C°-on tartjuk. A tápközeget a fermentáció egész tartama alatt 460 liter/perc levegőárammal szellőztetjük. A fermentáció kezdete után 6 órával kezdjük meg a keverést és a fermentáció egész további folyamán percenként 175 fordulattal folytatjuk. A termelt antibiotikum elkülönítését a 3. példában leírt módon végezzük. 3. példa: Ez a példa az A3823 antibiotikum tisztított koncentrátumának a fermentációs léből történő előállítását szemlélteti. A 2. példában leírt módon kapott 825 liter fermentációs léhez 21 kg kereskedelmi minőségű szűrési segédanyagot adunk. A levet a szűrőanyaggal alaposan elkeverjük, majd egy 60 cm átmérőjű lemezes-keretes szűrőn át leszűrjük. A szűrőlepényt a szűrőn annyi vízzel mossuk, hogy a szűredék teljes térfogata ismét 825 liter legyen. A szűrőlepényt azután félretesszük abból a célból, hogy ebből is további antibiotikum-mennyiséget nyerjünk ki. A szűredékhez kb. 550 liter kloroformot adunk, majd az elegy pH-értékét 5 n sósavval kb. 3-ra állítjuk. A vizes és a szerves oldószeres fázist kb. 30 percig alaposan keverjük egymással, majd centrifugálással szétválasztjuk a fázisokat. Az extrahált fermentációs levet kiselejtezzük, a kloroformos fázist pedig vákuumban kb. 9450 ml térfogatra pároljuk be. IC 15 20 25 30 35 Ezután a kloroformos koncentrátumot egy 12—40 szitafinomságú „Pittsburgh Cal" aktív szénnel töltött, 10 cm átmérőjű, 168 cm magas üveg adszorbens-oszlopon vezetjük keresztül, amelyet előzőleg 50 liter (percenként 500 ml sebességgel átvezetett) kloroformmal mostunk. A kloroformos koncentrátumot percenként kb. 200 ml sebességgel vezetjük át az oszlopon. A távozó folyadék első 4 literjét — amely az oszlopon visszatartott oldószer-térfogatnak felel meg _ kiselejtezzük. A kloroformos koncentrátum után mosófolyadékként ismét kloroformot vezetünk át az oszlopon. Kb. 50 litert fogunk fel az oszlopról távozó folyadék első frakciójaként; ez tartalmazza az antibiotikumot. Ezt a folyadékot vákuumban kb. 370 ml térfogatra pároljuk. A szűrőlepényből további antibiotikum-menynyiséget nyerünk ki oly módon, hogy 70 liter metanolt keringtetünk a szűrőlepényt tartalmazó szűrőn keresztül. Az így extrahált szűrőlepényt azután kiselejtezzük, az egyesített metanolos eluátumot pedig vákuumban kb. 13 liter térfogatra pároljuk be. A koncentrátumhoz kb. 8,7 liter kloroformot adunk, a pH-értéket 5 n sósavval kb. 3-ra állítjuk és a két fázist 30 percig alaposan keverjük egymással, majd centrifugálással szétválasztjuk a fázisokat. Az extrahált vizes fázist kiselejtezzük, a kloroformos fázist pedig vákuumban kb. 420 ml térfogatra pároljuk be. Az így kapott koncentráciumot azután egyesítjük a fermentációs lé szűredékéből kapott koncentrátummal és ebből a nyers koncentrátumból nyerjük ki az 1. példában leírthoz hasonló módon az A3823 antibiotikumot. Szabadalmi igénypontok: 40 1. Eljárás az A3823 antibiotikum előállítására, azzal jellemezve, hogy a Streptomyces cinnamonensis ATCC 15 413 mikroorganizmus-törzset egy asszimilálható szénforrást (előnyösen melaszt, glükózt, fruktózt, maltózt, keményítőt 45 és/vagy inozitot) és asszimilálható nitrogénforrást (előnyösen peptont, szójalisztet és/vagy aminosavakat), továbbá szervetlen sókat (előnyösen nátrium, kálium, ammónium, kalcium, foszfát, klorid és karbonát ionokat) tartalmazó 50 tápközegben aeröb alámerülő kultúrában az A 3823 antibiotikum számottevő koncentrációjának a tápközégben való felgyülemléséig tenyésztjük, majd az antibiotikumot kinyerjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás kiviteli 55 módja, azzal jellemezve, hogy az A3823 antibiotikumot a tápközegből szűrés, a szűredék szerves oldószerrel való kivonása, a szerves oldószeres kivonat , betöményítése és az A3823 antibiotikumnak a betöményített oldatból való 60 kristályosítása útján nyerjük ki. 1 ábra A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója. 6806375. Zrínyi (T) Nyomda, Budapest V., Balassi Bálint utca 21—23. 7
