154162. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a tetraciklin-csoportba tartozó tiszta antibiotikumok előállítására
» 15 hidroxid hozzáadásával 7,5 és 8,0 közöttire állítjuk be. i Az alkalikus oldatot egy Duolite C—25 kationcserélővel töltött oszlopon folyatjuk keresztül 15 ml/perc atfolyatási sebességgel. Az oszlopról távozó folyadékot ismét egy ugyanilyen töltetet tartalmazó oszlopon vezetjük keresztül. E második oszlopról távozó folyadékot azután félretesszük és a volfrámét visszanyerésére hasznosítjuk. Az antibiotikumot az ioncserérőről 3 liter n ammóniumhidroxidoldattal eluáljuk; az ammóniaoldatot előbb a második, majd az első oszlopon folyatjuk keresztül. A kapott eluátumot 30 mm Hg vákuumban, 45 C° hőmérsékleten 1 liter térfogatra töményítjük be. A betöményített oldatot 500 ml desztillált vízzel 'hígítjuk, majd egy .2 cm átmérőjű, 300 g Amberlite IRC 411 ioncserélővel töltött oszlopon folyatjuk keresztül 15 ml/perc atfolyatási sebességgel. Az oszlopról távozó folyadékot vákuumban 500 ml térfogatra töményítjük be. Ehhez a betöményített folyadékhoz 1,5 pH-érték eléréséig sósavat adunk, majd tovább töményítjük 100 ml térfogatig. A kapott oldatot nátriumkloriddal telítjük és lassan lehűtjük. A levált kristályokat szűréssel elkülönítjük, 20 ml desztillált vízzel mossuk és vákuumban megszárítjuk. Ily módon 84%-os hozammal kapjuk a 880 gamma/mg tisztasági fokú oxitetraciklin-Jhidrokloridot. 9. példa 5 liter fermentációs levet, amelynek tetraciklintartalma 6200 gamma/ml, az 1. példában leírt módon mentesítünk a micéliumtól. A leszűrt fermentációs léhez 2,0 pH-értéknél 42 g Na2 W0 4 • 2H2 0 200 ml vízzel készített oldatát adjuk, majd 10%-os sósavoldattal ismét 2,0 pH-értékre állítjuk be. A csapadékot 4 óra hosszat állni hagyjuk, majd leszűrjük. A szűrőről levett csapadékot 500 ml desztillált vízben szuszpendáljuk és 8,5 pH-értéik eléréséig 10%-os nátriumhidroxidot adunk hozzá. A kapott oldatot leszűrjük és a szűredékhez addig adunk lassan 10%-os sósavat, míg az 1,0 pH-értéket el nem érjük. A levált komplexet ismét leszűrjük, a csapadékot 200 ml desztillált vízben szuszpendáljuk és 10%-os nátriumhidroxidoldatot. adunk 7,5 és 8,0 közötti pH-érték eléréséig hozzá. Az így kapott alkalikus oldatot egy Duolite C—25 kationcserélővel töltött oszlopon folyatjuk keresztül 30 ml/perc atfolyatási sebességgel. Az oszlopról lefolyó oldatot egy ugyanilyen töltetet tartalmazó második oszlopra visszük, majd a második oszlopról távozó folyadékot félretesszük a volfrámét regenerálása céljából. Az antibiotikumot az ioncserélőiről 31 g n ammóniumhidroxidoldattal eluáljuk; az ammóniaoldatot előbb a második, majd az első oszlopon folyatjuk keresztül. A kapott eluátumot vákuumban (30 mm Hg-oszlop) 40 C° hőmérsékleten 400 ml térfogatra töményítjük be, 16 majd egy Amberlite IRC 411 ioncserélővel töltött oszlopon folyatjuk keresztül 20 ml/perc atfolyatási sebességgel. Az oszlopról távozó folyadékot vákuumban 200 ml térfogatra töményít-5 jük be és pH-értékét 10%,-os sósavval 3,8-ra állítjuk be, amikoris tetraciklin-kristállyal beoltjuk a tömény oldatot. Az oldatot ezután 2 óra hosszat keverjük, majd éjjelen át hűtőszekrényben állni hagyjuk. 10 Az elegyet leszűrjük és a tetraciklin-bázisból álló csapadékot levegőn megszárítjuk és liofilizáljuk. Ily módon 78%-os hozammal kapjuk a 830 gamma/m'g tisztasági fokú tetraciklint. 15 10. példa A 9. példa szerinti módon kapott 5 liter fermentációs léhez 36 g nátrium-paravolframátot <Na6 W 7 0 24 -16H 2 0) és az elegy pH-értékét 10%-20 os sósavval 1,5-re állítjuk be. Ezután 150 g „Dicalit 4180" szűrőanyagot adunk hozzá keverés közben, majd leszűrjük az elegyet. A csapadékot 1,5 liter desztillált vízben szuszpendáljuk és 10%-os nátriumhidroxidoldatot 25 adunk hozzá 8,5 pH-érték eléréséig. A szuszpenziót leszűrjük és a csapadékot 500 ml 10,0 pH-értékű vízzel utánamossuk. A főszűredéket egyesítjük a mosófolyadékkal, majd a tetraciklin volfrám-komplexét 20%-os sósav 2,0 pH-30 értékig történő hozzáadásával ismét lecsapjuk. A lecsapott komplexet 100 g Dicalit szűrőanyaggal ismét leszűrjük és 100 ml 2,0 pH-értékre savanyított desztillált vízzel mossuk. A mosott csapadékot 600 ml desztillált vízben 35 szuszpendáljuk és a szuszpenziót 10%-os nátriumhidroxidoldattal 9,0 pH-értékre lúgosítjuk. A kapott szuszpenziót leszűrjük, a szűrőn maradt csapadékot 400 ml 9,0—10,0 pH-értékre lúgosított desztillált vízzel mossuk. A szűredé-40 ket egyesítjük, 10%-os sósavval 7,5 pH-értékre állítjuk, majd 60 g szilárd ammóniumkloridot, ezután 160 ml 20%-os kalciumkloridoldatot és 10 ml 1%-os alkoholos dodecilkarbamilmetilbenzil-dimetil-ammóniurnkloridoldatot adunk 45 hozzá, majd 8,0 és 8,2 közötti pH-érték eléréséig 10%-os nátriumhidroxidoldatot csepegtetünk az elegyhez. A levált tetraciklin-kalciumsót 50 g Dicalit segítségével leszűrjük. A csapadékot 1 g kalciumkloridot tartalmazó 80 ml desztillált 50 vízzel mossuk. A szűredéket félretesszük és a volfrámét regenerálására hasznosítjuk. A tetraciklin-kalciumsót mosás után 30 mm Hg vákuumban 40—45 C° hőmérsékleten meg-55 szárítjuk. A száraz kalciumsót 2 liter metanollal, amelyhez 25 ml tömény sósavat adtunk, több részletben extraháljuk. A kivonatokat egyesítjük és leszűrjük. A leszűrt metanolos oldathoz 5 g aktívszenet adunk, 40 C° hőmérsék-60 létre melegítjük és gyorsan leszűrjük. A szűrőn maradt aktívszenet 100 ml megsavanyított metanollal mossuk. A szűredékeket egyesítjük és a metanolt vákuumban részben ledesztilláljuk. 1,5 liter metanol ledesztillálása után 200 65 ml desztillált vizet adunk a maradékhoz és to-8
