154057. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és készítmény izocitrát-dehidrogenáz-aktivitás meghatározására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1966. I. 05. (AE—198) Német Demokratikus Köztársaság-beli elsőbbsége: 1965. IV. 09. Közzététel napja: 1967. IV. 22. Megjelent: 1968. III. 15. 154057 Szabadalmi osztály: 42 1 3 Nemzetközi osztály: G 01 n Decimái osztályozás: Feltaláló: Dr. med. habil. Wagenknecht Claus, Berlin-Treptow, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: VEB Arzneimittelwerk Dresden, Radebeul, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás és készítmény izocitrát-dehidrogenáz-aktivitás meghatározására A találmány tárgya eljárás és 'készítmény az állati és emberi szervezet extra- és intraoelliuláris folyadékában levő izocitrát^dehidnogenázaktivitás kimutatására és meghatározásaira. Ismeretessé válít az,, hogy az izoertrát-dahidrogenáz {ICDH) az izocitrátnak alfa-ketglutaráttá való átalakítását a nikotmiaimid-iademindinukletoid-foszfát (NADP) koenzin és az Mn++ kofaktor jelenlétében egyidejű széndioxid lehasítással elősegíti. Az (ICDH) aktivitást ismert módon úgy lehet meghatározni, hogy a képződött nikiO'tiniamid-iad'enindinfukleotid-foszfát-hidrogén vegyületének (NADPH2) mennyiségét, ill, ennek az ibolyántúli tartományban (S40, ill. 360 mm) való változását az időegységiben mtérik. Egy másik tehetőség a meghatározásra aibban áll, hogy az alfa-ketoglutársavat fenilhidrazinnal fotométeresen meghatározható színezékkomplevszé lakítják át. Az első módszer hátránya az, hogy a mérés kivitelezésére az ibolyántúli tartományban az extinkirioválitozást az időegysiég alatt mérő optikai berendezések szükségesek,. A színezékkompléxxel dolgozó eljárás hátránya pedig abban foglalható össze, hogy ia reakció kinetikailag nem követhető, ezenkívül a menés idő- és munkaigényes. A fentiekből adódik az a feladat, hogy az izocitnát-dehidroganáz aktivitást UV-készüléfc, ill. más fotométerek nélkül, egyszerű eszközökkel lehessen kinetikiailag is meghatározni. A találmány feladata tehát a kinetäkailag csak az ibolyántúli tartományban követhető 5 reakciót a látható fény huliámihossz tairtotmányban lefolyó, emberi szemmel is éraékelhető reakcióvá átalakítani. Azt találtuk, hogy a reakció mérőláne és. egy 10 színezék rendszerinél, nevezetesen a fenazinnietoszulfát és diklórfenolindofenol színezék-rendszer segítségével követhető. A reakció közben az 'oxidációs reakciónál képződő NADPH2-t a találmány szerint hozzáadott fenazinmetoseul-15 fáttal oxidáljuk. A színezékanyag hidrogénjét a diklórfenolindofenolruak adja át. A mérőMnc bekapcsolásával az oxidációs aktivitás a diklórtfenolindofenoikiak leukoszínezéfo-20 anyaggá való átalakításával lesz aranyos. Ezáltal exakt aktivitásmérés válik lehetővé. Az izocitrát dehidrogenáz-aktivibáisnak a látható hullémihosszú fény tartományban,, optikai segédeszközök nélkül való mérése folytán a re-25 akció alkalmazási köre különösen a gyógyászatban erősen kiterjeszthető. A vizsgálati módszer egyszerű eszközei helyi járványszűrővizsgálaitoknál, továbbá az ambuláns, ül. állandó orvosi diagnosztikában jól felhasználható. A vizsgálat S0 egyszerű és gyors kivitelezése azt is lehetővé 154057