154046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prazinomicin előállítására

154046 Paradiesampaszta — zabliszt -^agáron a légi mioélium nedvzöld. A fonákja sárgászöld N+PieEs. Elesatő — malátakivoinatTagaron a légi micélium nedvzöld, a fonákja krémsárga. Oldható pigmentek nem képződnek. Szintetikus sós keményítős agáron a légi mioéliuim fűzöld, idővel sötét szürkészöldre változik, a fonákja vörösesbarna. Oldható pigmentek nem képződnek. Á mikroorganizmus általános jellegzetességei a következők:: a spóra színe zöld, a spóratartók sarló alakúak: vagy primitív spirálisok, ós nem kromogén proteines táptalajon. E jeltegzetességek névién Waksman viridus V sorozatába tartozik. A prazinomiidnnek (és valamennyi összetevőjének) széleskörű aktivitása van granihpozitív baktériumokkal és Mycobacterium tuberculosissal szemben, és korlátozottan aktív gram-negatív baktériumokkal szemben. Az antibiotikumok termelésiére a mikroorganizmust 215 C°-on alámerített aerob viszonyok között vizes táptalajon asszimilálható szénihidrát és nitrogén forrás. jelenlétében tenyésztjük. A fermentációt kb. I1&8 óra (hosszat folytatjuk, ennek az időnek: ,& végén az antibiotikumok kialakultak. A fermentáció befejeztével a prazino-micint metanollal extraháljuk a cmioéliumból vagy előnyösen a teljes fermentációs közegből, beállítva a közeg pIH-ját sósavval kb. 1,5'—3,0-ra eltávolítva az összes szilárd anyagot szűréssel és extrahálva a szűrőlepényt metanollal. A metanolos kivonatoikat 7,0 pH-ra semlegesítjük, és vákuumban bepároljuk vizes szuszpenzióvá. A vizes szuszpenziót ásványi savval kezelve 1,5 pH-ra állítjuk be, majd kloroformmal vagy butanollal extraháljuk. Ezután a. szerves fázist vízmentes nátriumszulfát fölött megszárítjuk, és kiis térfogatúra koncentráljuk. A koncentrátutmot 3—10 térfogat acebonnal hígítjuk, mire a nyers antibiotikum kicsapódik. A nyers prazinomi-cin tovább tisztítható desztillált vízben :szuszipendálva és a pH-ját nátriumhidroxid hozzáadásával kb. 8,5-re beállítva. A bázikus vizes oldatot n-butanollal extraháljuk a semleges anyag eltávolítása céljából. A vizes fázist sósavval megsavanyítva 1,5 pH-ra áHítjuk be, és n-butanollal extraháljuk. A butanolos kivonatot vákuumban bepárolva sötétbarna amorf terméket kapunk. A nyers prazinomicin előnyösen megtisztítható olymódon, hogy tízszeres mennyiségű vízben Sizuszpendóljuik, és a pH-ját nátriumhidroxid hozzáadáséval kb. 8,5-re állítjuk be. A lúgos vizes oldatot n-butanollal mossuk a semleges anyag eltávolítására. A vizes fázist beállítjuk 5,0 pHnra, és ismét mossuk n-butanollal. Eziután a vizes fázist 1,5—2|,0 pH-ra állítjuk be, és n-butanollal extraháljuk. A butanolos kivonatot nátriumíhidro'xiddal közÖTnbösítjük, és a keveréket szárazra pároljuk. Ilymódon a szabad savat kapjuk, és a nátriumionokat a nátriumsó vizes oldatának erős savas ionkicserélő gyantával való kezelése útján távolítjuk el. Az öt összetevőt az antibiotikumkeverékböl 5 nitrogénatrnoszféráiban végrehajtott ellenáramú megosztással vagy papírkromatográfiai úton választjuk el. '"> találmányt a következő példákon szemléltetjük. 10 1. példa: Paradicsompép — zablisztes ferde agart beoltunk Streptomyces prasinussal (ATCC 15285). 15 7—10 napig inkubáljuk, majd beoltunk vele 100 ml vizes szójaliszt táptalajt 500 ml-es Erlenmieyer-lombikokban. A germinációs táptalaj összetétele: 20 szójaliszt 15 g szárított burgcnyapép 15 g glukóz 50 g CoeV2iH2

0, 0,06%-os oldat 10 ml 25 CaCO:!

10 g agar 2,5 g desztillált víz 1 liter A táptalajt 121 C°-on 20 percig sterilizáljuk. A gőznyomás 1 att. A lombikot 25 C°-on for-30 gó keverőgépben 72—96 óra hosszat inkubáljuk. A germinációs lombikok tartalmának 10%-át átvisszük 100 ml alábbi táptalajt tartalmazó 500 ml-es Erlenmeyer-lombikokba: 35 szójaliszt 60 g glukóz 50 g CaC03

10 g desztillált víz 1 liter A fermentációs lombikokat inkubáljuk, és 40 ugyanúgy keverjük, mint az előző germinációs lombikokat. 3 5 és 7 nap után mintát veszünk. E célból a micéliuimot kicentrifugáljuk, a folyékony közeggel azonos térfogatú metanollal extraháljuk, és megelemezzük egy agar-diffu-45 ziós módszerrel. Az eredmények a következők: 50 55 Öra 72 120 168 Biológiai aktivitás (diffúzió-egység/ ml) 16,8 26,2 42,5 A próbára használt mikroorganizmus Staphylococcus aureus 209P volt. 2. példa: Egy 600 literes Sitreptómyces prasinus (ATCC 15 826) adagot a következőképpen fermentá-60 iunk. Oltóanyag készítése. Oltóanyagf orrás: Streptomyces prasinus (ATCC 15 825) kultúra, tejben való liofilizálás 65 útján eltartva. 2