154046. lajstromszámú szabadalom • Eljárás prazinomicin előállítására
5 154046 Közeg: szójaliszt 15 g szárított burgonyapép 15 g glukóz 50 g CoCl2 -2 H 2 0, 0,06%-os oldat 10 ml CaíCJOá 10 g agar 2,5 g desztillált víz 1 liter A táptalajból 125 ml-t egy 500 ml-es lombikban forgó keverőgépben 96 óra hosszat 26 C°on inkubálunkí.. Ebből a kultúrából 126 ml-t hozzáadunk egy 4000 ml-es Icralbikbain 1000 ml fenti összetételű táptalajhoz, amelyből azonban az agart kihagytuk, ós iráziógíépen 48 óra hosszat 25 C°-on inikubalj.uk :. A kapott anyagból 1000 ml-t (hozzáadunk 240 liter alábbi összetételű táptalajhoz és 72 óra hosszat inkubáljuk: szójaliszt • 15 g keményítő 15 g cerelóz 55 g CiaO03 10 g CdCl2 -2 H 2 0 0,006 g desztillált víz 1 liter Az inkubáció alatt a táptalajt 30 cm/perc félszíni levegősebességgel levegőztetjük: és keverjük az első 12 órában, majd utána 90 cm/perc felszíni levegősebességgel levegőztetjük és keverjük. A kapott anyagból 36 litert hozzáadunk 600 liter alábbi összetételű táptalajhoz, és levegőztetés ós keverés köziben 168 óra hosszat irikubáljuk: 60 g 55 g 10 g 0,05 o/o szo cerelóz: CaC03 habtalanító A fermentációs lét sósavval beállítjuk 1,5—3,0 pH-ra, 6 kg szűrést elősegítőt adunk hozzá, és az összes oldhatatlan anyagot eltávolítjuk szűréssel. 3. példa A 2. példában kapott szűrőlepényből 10 kg-ot kétszer 1—1 óra alatt 15—»15 liter metanollal extrahálunk. Az extrakciók között a lepényt szűrőre visszük. Az egyesített szűredékeket nátriumlhidroxiddal 6—7 pH-jra állítjuk be, és az oldatot a metanol eltávolítása céljából vákuumban bepárolva kb. 1 liter vizes szuszpenziót kapunk. A metanolos kivonat bepárlása útján kapott vizes szuszpenziót sósavval < 1,5 plH-ra állítjuk be, éls háromszor 0,25;—0,25 térfogat kloroformmal extraiháljuk. A pH-t minden extrafeciói után meghatározzuk, és szükség esetén újra beállítjuk 1,5 pH-ra. Az egyesített kloroformos, kivonatokat vákuumban sűrű sziruppá pároljuk be. A kapott sűrű sziruphoz 4 liter acetont adunk, a keveréket 1 óra hosszait rázatjuk, és szűrőre visszük. A lepényt vákuumban szobahőmérsékleten megszárítjuk, 565 g sűrű szirupból 61,1 g aicetonban oldhatatlan, barnás színű amorf szilárd anyagot kapunk, amelynek az ak-5 tivitása 725 egység/mg. 4. példa A 3. példa szerint kapott 60 g acetonban old-10 hatatlan terméket dörzscsószében finom porrá őriünk, 3,2 liter vízben {3,4 pH) szuszpendáljuk, és 25 ml 2,5 n nátriumhidroxid hozzáadásával keverés közben a pH-ját 8,6-ra állítjuk be. A visszamaradt oldhatatlan anyag-nyomokat nem 15 vesszük figyelembe. A lúgos vizes oldatot háromszor 800—000 ml nnbutanollal extraiháljuk. A kapott sötétvörös vizes fázist 82 ml 5%-os sósavval megsavanyítva 2,0 pH-ra állítjuk: be, és háromszor 800'—800 ml n-butanollal extra-20 háljuk. Az egyesített butanolos kivonatokat vákuumban bepárolva sötétbarna amorf savas terméket kapunk 2i9,0 g mennyiségben, amelynek aktivitása 21200 egység/mg. A termék tovább tisztítható a savas frakció 25 ellenáramú megosztásával kloroform — metanol — víz-rendszerben (5:4:2 térfogat). Az aktív frakciót ezután ismét megosztjuk n-butanol-etilacetát-víz-rendszarlben (2:1:3 térfogat). Az aktív frakciót tartalmazó csöveket egyesítjük, 30 vákuumban szárazra pároljuk, a maradványt metanolban oldjuk, ós a színtelen terméket etilaaetáttal kicsapjuk. A kapott prazinomicin aktivitása 2i655 egység/ing1 , olvadáspontja {bomlás közben) '164—166 C°, infravörös színképe az 1. 35 ábrán látható. Az anyag a szabad levegőn súlya 7,2%^ának megfelelő vizet vesz fel, amit ismét elveszít, ha 80 C°~on 0,1 torr nyomás alatt szárítjuk. 40 Összetételé (hidrátvíztartalmú alak): 46J1Í8 % C 7,17 o/o H 4,05 % N 2,137 % P 45 40,23 % O (a különbségből). Semlegesítési egyenértéke nátriumhidroxiddal titráltva: 607. Erős savval hidraiizálva, a pnazinomicinből 50 foszforsav és ninhidirid-pozitív anyagok, többek között DHglukózamin! és 6-dez:oxi~D-glukózamin szabadítanak fel. Az anyag reakciója negatív ninhidírinnel és ezüstnitráttal, elleniben kékre színeződik ciklo-55 hexánban oldott 2°/0 terc.-butil4úpoklorittal, majd káliúmjodidós keméhyítőoldattal kezelve. 5. példa 60 A 3, példában leírt módion kapott 10 g acetonban oldhatatlan port dÖrzscsészében finom porrá őriünk, hozzáadunk: 100 ml vizet (3,4 pH), és keverés közben 4,3 ml 2,5 n náitronlúggal 9,0 pH-ra állítjuk; be. A visszamaradt oldhatat-65 lan anyag-nyomokat nem vesszük figyelembe. 3
