153831. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1,4-dién-3,17-dion-szerkezetű szteroidok mikrobiológiai előállítására
153831 tént: A mikrobiológiai átalakítás után a baktériumsejteket szűréssel eltávolítottuk. A szürletet 3X20 térfogatszázalék klórozott szénhidrogénnel, vagy egyéb vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel kivontuk. Az egyesített kivonatot híg nátrium-hidroxid oldattal 8-hidroxi-kmolinmentesre mostuk, majd szárazpárlás után a maradékot alkalmas oldószerből kristályosítottuk. Eljárásunkat ez alábbi példák szemléltetik: 1. példa: 5 liter I. jelű táptalajt sterileztünk 10 literes üvegfermentorban. 100 ml azonos táptalajú egy napos rázott kultúrával oltottuk be. A fermentort 37 C°-on 250 fordulat/perc kevertetéssel, 5 liter percenkénti, a tenyészet felszínére fújt steril levegő mellett inkubáltuk két napig. Ezután a tenyészetet ülepedni hagytuk és a táptalajt azonos térfogatú 0,4%-os nátrium-klorid-oldatra cseréltük ki és 3 g koleszterint és 360 mg 8-hidroxi-kinoiint adagoltunk a tenyészethez 60 ml etanolban oldva. A fermentálást a növesztés körülményei között folytattuk. 6 óránként 100 ml mintát vettünk 60 órán át. A mintákat diklór-etánnal vontuk ki, az egyesített kivonatot 1%-os nátrium-hidroxid oldattal 8-hidroxi-kinolin mentesítettük, majd vízzel semlegesre mostuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítottuk és bepároltuk. A maradékot 5 ml acetonban vettük fel. Az acetonos oldatot 40% metanolt tartalmazó propilénglikollal impregnált Maherey-Nagel 214-es papírra cseppentettük és propilénglikollal telített széntetraklorid : metilciklohexán = 1:1 keverékkel leszálló rendszerben kromatografáltuk. A papírokat szárítás után kontakteljárással ultraibolyafényben fényképeztük, ennek alapján oldottuk le a keletkezett termékeket 10 ml absz. alkohollal. Az alkoholos oldat extinkcióját l = 244 m/t-nál határoztuk meg és a kapott extinkciót közvetlenül androszta-l,4-dién-3,17--dion tartalomra számítottuk át. A kapott értékek: Mintavétel androszta-l,4-d időpontja -3,17-dion tárta 0 óra 0 /xg/ml 6 óra 42 /ig/ml 12 óra 90 /xg/ml 18 óra 149 /xg/ml 24 óra 162 /tg/ml 30 óra 190 /xg/ml 36 óra 191 /xg/ml 42 óra 202 /.xg/ml 48 óra 238 /xg/ml 60 óra 229 /ig/ml Az átalakítás befejezése után a fermentációs folyadék maradékát szűrtük, a szürletet 3X20 térfogatszázalék diklór-etánnal vontuk ki. A kivonatokat egyesítettük és szárítás után szárazra pároltuk. 20 ml diklóretánban 1 g í-naftolt adtunk hozzá és 24 órán keresztül 0 C°-on tartottuk. A kristályos androszta-l,4-dién-3,17-dion-béta-naftol molekulavegyületet szűrtük (op.: 168—170 C°), majd 200 ml diklór-etánban oldottuk. lo/0 -os vizes nátrium-hidroxid oldattal 'béta-naftolmentesítettük, majd vizes mosás és szárítás után szárazra pároltuk és kevés éterből kristályosítottuk. A kristályokat szűrtük, szárítottuk. 850 mg androszta-l,4-dién-3,17-diont kaptunk, op.: 141—142 C°, [«]D = 115°, (c=l, kloroform), TM?^f : 244 rnu. Az anyalúgból további 60 mg androszta-l,4-dién-3,17-dion volt még kinyerhető. Kinyerés: 38 súlyszázalék. 2. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy koleszterin helyett 5 g koleszt-4-én-3-ont adagoltunk a tenyészethez. Az átalakítás követése és a feldolgozás szintén azonos az 1. példában leíi"takkal. Kinyerés: 40 súlyszázalék. 3. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy koleszterin helyett 3 g 5-alfa-kolesztán-3 béta-ol-t adagoltunk a tenyészethez. Az átalakítás követése és a feldolgozás szintén azonos az 1. példában leírtakkal. Kinyerés: 34 súlyszázalék. 4. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy koleszterin helyett 3 g béta-szitoszterint adagoltunk a tenyészethez. Az átalakítás követése és a feldolgozás szintén azonos az 1. példában leírtakkal. Kinyerés: 18 súlyszázalék. 5. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy koleszterin helyett 1 g pregn-5-én-3 béta-ol-20-on-3-acetátot adagoltunk a tenyészethez. Az átalakítás követése és a feldolgozás szintén azonos az 1. példában leírtakkal. Kinyerés: 63,5 súlyszázalék. 6. példa: Mindenben az 1. példa szerinti módon jártunk el, azzal a különbséggel, hogy koleszterin helyett 1 g androszt-5-én-3 béta-ol-17-on-3-acetátot adagoltunk a tenyészethez. Az átalakítás követése és a feldolgozás szintén azonos az 1. példában leírtakkal. Kinyerés: 70 súlyszázalék. 7. példa: 500 ml-es Erlenmayer-lombikban levő 100 ml steril III. jelű táptalajt öt napos ferde agar-tenyészetről készített 10 ml bouillonos sejt-10 15 20 25 S0 25 40 45 50 55 60 3
