153741. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxokobalamin és egyéb hidroxo-korrinoid származékok előállítására
153741 Chem. Eng. News 28. 1634. 1950., E. L. Smith: J. Pharm. Pharmacol. 2. 409. 1950.). Hasonló eljárást közöl a 678,950 sz. angol szabadalmi leírás is, mely szerint vizes vagy metanolos közegben Pt vagy Pd katalizátor je- 5 lenlétében légköri nyomáson végzett hidrogénezéssel jó kitermeléssel hidroxokobalamint lehet előállítani. Ismeretes továbbá, hogy a B12 -vitamin jellegzetes színét a molekulában levő kromofor- 10 -csoportok, a 6 kettőskötés képviseli. Erős oxidálószerek alkalmazásával, így pl. H2 0 2 híg vizes oldataival történő kezelésnél a molekula károsodik, sőt elszíntelenedhet. A fent ismertetett eljárások közös sajátsága, 15 hogy nem adnak egységes végterméket. A fémes redukciónál egy-vegyértékű alakig redukálódhat a reakciótermék, savanyú közeg hatására dezamidálás történhet, amikor a korrinvázhoz kötődő egy vagy két propionsavamid- 20 -oldalláncnál az amino csoport lehasad és szabaddá lesz a karboxil-csoport. Ezáltal a molekula már B12 vitamin-antagonistává válik. Katalitikus redukciónál, melyet eddig kizárólag légköri nyomáson végeztek azért, hogy a 2? kromofor csoportok károsodását elkerüljék, kb. 10—20%-nyi átalakítatlan termék maradt viszsza. Ez részben úgy is adódik, hogy a molekuláról lehasadt, de a még oldatban levő cianid-csoport redukció befejeztével visszakötődik. io A gyógyszerkönyvi követelmények egybehangzóan 5% egyéb szennyeződést engednek meg a kész termék mellett, így a különféle módon előállított redukció-terméket még hosszas elválasztó műveleteknek kell alávetni. Ezek 35 részben Brockman A12 0 3 oszlopon történő kromatográfiás, ioncserélő gyantás, valamint egyéb, pl. cellulózporos elválasztások. Az elválasztások kivitelezése hosszadalmas és a kívánt tisztaságot ezek kombinációjával is nehéz elérni. 40 Meglepő módon azt találtuk, hogy az átalakítás úgyszólván mennyiségileg keresztülvihető a molekula károsodása nélkül, ha a vizes metanolban oldott kristályos B12 vitamin oldatához valamely hidrogénező katalizátort, elő- 45 nyösen palládium-taplót adunk és nagy nyomáson, 10—100 atm. között szobahőmérsékleten végezzük a hidrogénezést. A molekula kromofór-csoportjai a gyengén savas közegben végzett hidrogénezésnél nem 50 károsodnak, a redukció csupán két vegyértékű termékig megy, a cianid-csoport mennyiségileg lehasad a molekuláról és teljesen átalakul egyéb termékké, így metilaminná, tehát a redukció befejeztével a visszaciánozódás lehető- 55 sége kizárt. A gyengén savanyú pH-érték elérésére egyaránt alkalmas bármely szerves sav, mint amilyen a hangyasav, ecetsav, oxálsav, vagy egyszerűen valamely ásványi sav, így pl. a sósav, 60 kénsav vagy foszforsav is. A hidrogénezett és katalizátortól mentes oldaton 1—2 órán keresztül levegőt fúvatunk át, hogy ismét 3 értékű kobaltot tartalmazó származékot kapjunk. 65 A jelen találmány szerinti eljárás igen alkalmas nagyüzemi méretekben B12 -vitamin, valamint egyéb korrinoid származék egyszerű és gyors átalakítására hidroxo-termékké, inaktív melléktermékek, vagy közti termékek mellőzésével. A jelen eljárás értelemszerűen hasonlóan alkalmazható a fermentlé feltárásától egészen a kristályos termékig a feldolgozás bármelyik lépésében, ill. a nem kristályosodó etiokobalamin frakciók és keverékeik izolálási módszere kapcsán. A képződött hidroxokobalamint, vagy az átalakított egyéb származékokat, az alkohol eltávolítása után, bármely ismert módon, pl. szerves oldószeres kirázással, szenes adszorpcióval, vagy fenolhalogén-származékaival stb. betöményítve és tisztítva kinyerhetjük. Kinyerésre és bekoncentrálásra alkalmazhatók még közvetlenül metanolos oldatból, a különféle ioncserélő papírok, így a dietilaminoetil-cellulóz, karboximetil-cellulóz vagy ioncserélő gyanták is. A mikleotidtartalmú származékok kristályosítása a B12 -vitamin analógiájára, víz-aceton elegyből, nagyobb aceton-koncentráció mellett jól elvégezhető. A jelen találmány szerinti eljárás részleteinek szemléltetésére az alábbi példák szolgálnak : 1. példa: 40 g kristályos B12 vitamint 1 liter 1 : 2 ti. arányú víz-metanol elegyben feloldunk. Az oldatot pH-értékét ecetsavval 4,0—4,5-re állítjuk. Nagynyomású 2 literes autoklávba, sorrendben először a kevés vizes metanollal szuszpendált 8 g palládium-taplót, majd a fenti B12 vitamin-koncenfrátumot beletöltjük. A berendezést légmentesítés után nitrogén-gázzal többször átmossuk, majd a bevezetett hidrogén-gáz nyomását 100 atmoszféráig növeljük. 8 óra hosszat keverjük, majd másnapig állni hagyjuk. A készülékből az oldatot nitrogén-fedőgáz alatt kiszívatjuk, majd leszűrjük. Az alkoholos oldat pH-ját ecetsavval 5-re visszaállítjuk, majd erős áramban két órán keresztül levegőt fúvatunk át rajta. Az elegy alkoholtartalmát, a desztillációnál fellépő bomlás elkerülése végett úgy távolítjuk el, hogy az oldatot kb. 0,75 kg karboximetil-cellulóz oszlopra visszük. Az adszorbátum kimosását alkohol-mentességig vízzel folytatjuk, majd az oszlopon megkötött hidroxokobalamint 1/30 n ecetsavval oldjuk le. A kb. 5 literes eluátumból fenol-kloroform eleggyel a hidroxokobalamint koncentráljuk, majd vizes átfordítás után acetonnal kikristályosítjuk. így 33—35 g kristályos terméket kapunk, mely újabb átkristályosítás után 31—33 g hidroxokobalamint eredményez.
