153665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
153665 11 12 mérsékleten 10 ml etilacetátot adunk hozzá, amikor ismét diciklohexilkarbamid válik ki. Ezt is kiszűrjük és a leszűrt oldatot víz és etilaeetát elegyével felvesszük, a szerves fázist jéghűtés közben n-sósavoldattal, n-nátriumhidrogénkarbonátoldattal, végül telített nátriumkloridoldattal mossuk. A szárított etilacetátos oldatból az oldószer elpárologtatása! során 2,2 g BQC-tripeptidészter válik ki, amely 136—138 fokon olvad. További 200 mg terméket nyerhetünk még ki az: anyalúgból. ,[«]D = —12 ±0,5° (c = 2 metanolban). Vékonyrétegű kromatografálással RÍ43 = 0,75; kloroform-metanol 9:1 arányú rendszerben Rf = 0,7. 5. D-tirozil-D^szeril-D-metionin-metilészter 2,0 g (3,0 miUimol) BOC-tripeptidésztert 40 ml etilaicetátban melegítés közben oldunk, majd az oldatot gyorsan lehűtjük 25°-ra és keverés közben azonnal hozzáadunk 17,4 ml etilacetátos 4,6 n hidrogénkloridoldatot. 20 perces reakcióidő után a hidroklorid pelyhes amorf alakban kezd kiválni. A hasítás 75 perc alatt befejeződik, ekkor a szuszpenziót vákuumban kis térfogatra pároljuk be, az oldószert dekantáljuk és "a maradékot 10!—10 ml etilacetáttal kétszer mossuk. Az etilacetáttól még nedves hidrokloridot isimét szuszpendáljuk 20 ml absz. etilacetátban és gázalakú ammónia 1,25 n metanolos oldatának 4 ml-jét adjuk hozzá. Az anyag gyorsan oldódik és ammóniumklorid válik ki. Az oldatot leszűrjük és bepároljuk; 1,3:8 g (az: elméleti' hozam 86%-a) szabad tripeptidésztert kapunk. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálással Rf52 = RÍ« .= 0,4. 6. terc.Butiloxikarboíiil-D-szeril-D-tirozil-D-szeril-D-metionin-metilészter 1,38 g (3,3 millimól) fenti módon kapott tripeptidésztert 1,4 ml dimetilformamid és 23 ml aeetonitril elegyében oldunk, majd az oldathoz 764 mg <3,4 millimól) BOiC-D^szerin-hidrátot adunk és az elegyet —5° hőmérsékletre hűtjük le. 0,75 g (3,65 millimól) diciklohexilkarbodiimid 2 ml aeetonitrillel készített és ugyancsak előzetesen lehűtött oldatát adjuk hozzá, majd az elegyet 0° hőmérsékleten 1 napig reagálni hagyjuk. A kivált karbamidszármazékot leszűrjük, a szüredéket vákuumban szárazra pároljuk be, a bepiárliási maradékot sok: etilacetáttal felvesszük, az etilacetátos oldatot pedig 0° hőmérsékleten n-sósavoldattal, majd n-nátriumhidrogénkarbonátoldattal, végül vízzel mossuk. A szerves oldószeres oldatot ezután bepároljuk; a maradékból metanol hozzáadásával 875 mg BOC-tetrapeptidésztert különíthetünk el, amely 10:8—110°-on olvad; [«]D == +30 ±1° (c = 1 metanolban), Rf43 = 0,65. 7. terc.Butiloxikarbonil-D-szeril-D-tirozil-D-szeril-D-metionin-hidrazid 8:75 mg (1,45 millimól) BOC-tetrapeptidésztert nitrogén-légkörben, enyhe melegítés közben oldunk 12,5 ml 50%-os metanolban, majd az oldatot ismét szobahőmérsékleten hűtjük le. Ezután 0,71 ml Ihidrazinhidrátot adunk hozzá; kb. V2 óra múlva a hidrazid leválik. 2V2 óra múlva 1:2,5 ml vízzel hígítjuk az; elegyet és éjjelen át szobahőfokon keverjük. A 0° hőmérsékletre lehűtött reakeióelegyet leszűrjük, 5 ml jéghideg vízzel mossuk és a még nedves BOC-tetrapeptid 'hidrazidot 2 óra hosszat szuszpendáljuk 10 ml jéghideg vízben. Ilymódon. 678 mg BOC~tetrapeptidhidrazidot kapunk, amely 148— 186°-on olvad. 8. terc.Butiloxibarbonil-D-szeril-D-tirozil-D-szeril-D-metionil-gamma-terc.butil-L--glutamil-L-hisztidil-L-fenilalanil-L-arginil-Ij-triptofanil-glicin 1,43 g (2,4 millimól) terc.butiloxikarbonil-D-szieril-D-tiroeil-D-szeril-iD-metionin-hidrazidot 15 ml dimetilformamidban —10° hőmérsékleten szuszpendálunik és ugyanezen a hőmérsékleten 1,58 ml jéghideg 6 n sósavoldatot adunk hozzá. Ezután —8° hőmérsékleten 0,5 ml jéghideg 5 n nátriumnitritoldatot csepegtetünk az elegyhez és 25 percig hagyjuk —5° és —8° közötti hőmérsékleten reagálni. Egyidejűleg 1,65 g gamma-terc.butil-L-glutamil-L-hisztidil-Ljfenilalanil-L-arginil-L-triptofanil-glicint {1,0 mól; előállítására vonatkozólag vö. 1 310 513 sz. francia szabadalmi leírásunkat) oldunk 5 ml meleg dimetilformamidban, az oldatot —10° hőmérsékletre hűtjük és 1,85 ml trietilamint adunk hozzá. —15° hőmérsékleten hozzáadjuk' a BOC-tetrapeptidazid jéghideg oldatát, még 1 óra hosszat keverjük —10°-on, majd éjjelen át 0° hőmérsékleten reagálni hagyjuk. A reakcióelegyből kevés szervetlen só válik ki. Ezt szűréssel eltávolítjuk és a szüredéket nagyvákuumban kis térfogatra pároljuk be. Az így kapott nyers amorf BOC-dekapeptidet 100 ml 2 n ammóniumhidroxidoldat hozzáadásával lecsapjuk, leszivatással elkülönítjük és vízzel semlegesre mossuk. Szárítás után 1,88 g nyers dékapeptidszármazéfcot kapunk. 50 ml 90%-os metanolból átkristályosítva, 1,2 g tiszta BOC-dékapeptidhez jutunk, amely 214—218°-on felhabzás közben olvad; [a]o = —'12 ±2° (c = 0,55 50%-os piridinben). Rf52 = 0,25; üim = 0.7. 9. terc.Butiloxikarbonil-D-szeril-D-tirozil-D-szeril-D-metionil-ígamma-terc.buti^-L--glutamil-L-hisztidil-iL-fenilialariil-L-.arginil-Ij-triptofanil-glicil-terc.butilO'xikarbonil-L-lizil-L-prolil-L-valil-glicil-terc.butiloxikarbonil-iL-liz'il-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-L-iarginil-L-iargmil-L-prolil-L-valil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil^L-valil-L-tiriOzil-L-prolin-terc.butilészter 0,5 g s (0,345 millimól) fenti módon kapott BQC-dekapeptidet és 0,766 mg (0,35 millimól) tercJbutiloxikarbonil-L-lizil-L-prolil-L-valil-gli-cil-terc.butiloxikarbonil-L-lizil-terc.butiloxi-10 15 20 25 S0 35 40 45 50 55 60 6
