153665. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ACTH-hatású peptidek előállítására
13 153665, 14 karbonil^L-lizü-Lnarginil-L-arginil-I^prolil-L-valil-tercbutiloxikarbonil-L-lizil-L-valil-L-tirozil-L-prolin-terc.butilészter-trihidrokloridot 9 ml 80%-os piridinben 00 percig keverünk 45—50° hőmérsékleten. Ennek során tiszta oldat nem keletkezik. Ezután 121 mg (0,58 millimól) diciklóhexilkarbodiimidet adunk hozzá, majd további 5 óra múlva még ugyanilyen mennyiségi diciklohexilkarbodiimidet és összesen 24 óra hosszat hagyjuk reagálni 45i—50° hőmérsékleten. Az ennek során levált karbarrűdszármazék a kocsonyás reakeióelegyből nem szűrhető le, így a nyers kondenzációs terméket a diciklohexilkarbamiddal együtt, csapjuk ki sok etilacetát hozzáadásával a kocsonyás reakcióelegyből. Nyers hozam 1,2 g. 'Ezt a nyers terméket további tisztítás nélkül, közvetlenül felhasználjuk a szintézis következő lépésében. 10. D-szeril-D-tirozil-D-szeril-D-metionil-L-i-glutamil-L-hisztidil-L-fenilalanil-L-argi'• nil-L-triptofanil-glicil-L-lizil-iLr-prolil-L-valil-glicil-L-lizil-Lr-lizil-L-arginil-L-prolil-L-valü-I^lizil-L^vahl-L-tirozil-L-prolin-hexaaeetát 640 mg nyers védett BOe-24-peptid-terc.butilésztert nitrogén-légkörben 7 ml 90%-os trifluorecetsawal 30 percig szobahőmérsékleten kezelünk és az így lefolytatott hasítás után a nyers terméket nagymennyiségű peroxidmentes absz. éterrel kicsapjuk. Hozam: 570 mg. Tisztítás céljából a nyers peptidelegyet 0,5%-os triklórecetsav és szek.butanol között 300 fokozatban megosztásnak vetjük alá. A triklórecetsavat egy acetát-alakban levő Merek IH-ioncserélőoszlopon acetátra cseréljük ki és a metioninszulfoxid^származékót 2%-os vizes tioglikolsavoldattal 50° hőmérsékleten 24 óra hosszat redukáljuk metionin-peptiddé. A fenti képletnek megfelel D1-4 -béta 1-24 -kortikptripin-hexaacetát vékonyrétegű kromatográfiai vizsgálattal egységes anyagnak mutatkozik; [«jo = —78° 10%-os ecetsavban. Ibolyántúli színkép: lmax = .209; e = 7400, 2>max = 282; e = 7200. A Saffran-próba során az így kapott peptid jó ACTH-haást mutat. 2. példa: 1. terc.Butiloxikarbonil-'D-tirozil-L-szeril-L-metionin-metilészter 2,87 g (10 millimól) L-szeril-L-metionin-metilészter-hidrokloridot 32 ml jéghideg acetonitrilben szüszpendálunk és jéghűtés közben 1,55 ml i(10 millimól) trietilamint adunk hozzá. 30 perc múlva keverés közben leszűrjük, a reakcióelegyet a kivált só eltávolítása céljából, majd a szüredéfchez 2,81 g (10 millimól) tercbutiloxikarbonil-D-tirozint adunk. Ezután 226 mg (11 millimól) szilárd diciklohexilkarbodiimidet adunk az elegyhez és 0° hőmérsékleten tovább keverjük; Éjjelen át 0° hőmérsékleten reagálni hagyjuk, majd a levált karbamidszármazékot kiszűrjük és a nem1 reagált karbodiimidet 0,3 ml jégecet hozzáadásával elbontjuk. (5 A bepárlási maradékot etilacetátban oldjuk és az oldatot először jéghideg n-sósavoldattal, majd n-nátriumhidrogénkarbonátoldattal, végül félig telített nátriumkloridoldattal mossuk. A szerves oldószeres oldatot ezután bepároljuk, 10 a habos bepárlási maradékot pedig kevés etilacetátból "átkristályosítjuk. llymódon 4,35 g mennyiségben kapjuk a fenti metilésztert, ami 85%-os termelési hányadnak felel meg. A kapott termék 177-—178°-on olvad; [«]D = —34* ,45 ±0,5° (c = 2 metanolban). A termék vékonyrétegű kromatografálás során az alábbi Rf-értékeket mutatja: .: . . Rf43 = 0,65, '-".' ',-'•. "",.' .;. kloroform-metilalkohol 9:1 arányú rendszer-20 ben Rf == 0,4. 2. D-tírozil-L-szeril-L-metionin-metilészter 25 4 g BOC-tripeptidésztert az 1. példa 5. pontjában a D-peptidre vonatkozólag leírt eljáráshoz hasonló módon hasításnak vetjük alá és a .kapott észter-hidrokloridot metanolos ammóniaoldattal a szabad tripeptidészterré alakítjuk 80 át. llymódon 2,33 g amorf anyagot (az elméleti hozam 72°/o^) kapunk. Szilikagélen történő vékonyrétegű kromatografálással kapott Rf-értékek: Rf52 = 0,55; £5 RÍ43 = 0,45. 3. terc.Butiloxikarbamil-D-szeril-D-tirozil-L-szeril-L-metionin-metilészter 40 Ezt a tetrapeptidszármazékpt az 1. példában leírthoz hasonló eljárással alítjuk elő terc.butiloxidkarbonil-D-szerin és D-tirozil-L-szeril-L-metionin-metilészter diciklohexilkarbodiimid 45 segítségével, acetónitril és dimetilformamid 9:1 arányú elegyében lefolytatott kondenzáció útján. RÍ43 = 0,7. 50 . 4. terc.Butiloxikarbonil-D-szeril-D-tirozil-L-szeril-L-metionüvhidrazid A 3. pont szerint előállított tetrapeptidészter 55 875 g-ját •{ily* millimól) 12,5 ml 50%-os metanolban hidegen oldjuk és 0,71 ml hidrazinhidrát hozzáadásával 2 óra hosszat szobahőfokon, majd éjjelen át 0° hőmérsékleten állni hagyjuk. 530 mg hidrazidot kapunk, amely 156— 60 157°-on olvad. Az anyalúgból még további 100 mg hidrazidot nyerhetünk ki. összhozam 630 mg, az elméleti hozam 72%-a. Rf kloroform-metanol 8:2 rendszerben: 0,3; /
